GRP78保護胰島β細胞與重建IDDM免疫耐受效應與機制研究

《GRP78保護胰島β細胞與重建IDDM免疫耐受效應與機制研究》是依託華中科技大學，由沈關心擔任項目負責人的面上項目。

基本介紹

• 中文名：GRP78保護胰島β細胞與重建IDDM免疫耐受效應與機制研究
• 項目類別：面上項目
• 項目負責人：沈關心
• 依託單位：華中科技大學

中文摘要

I型糖尿病（IDDM）是一種主要由T細胞介導的器官特異性自身免疫病，本課題擬在前期研究免疫損傷與保護胰島β細胞工作的基礎上，設計以I型糖尿病（IDDM）發生相關的抵抗因子GRP78和免疫損傷相關的重要靶分子GAD65為切入點，採用來源於非肥胖性糖尿病小鼠（NOD 小鼠）的NIT-1 β細胞株作為體外研究模型，將糖尿病發生相關的抵抗因子GRP78基因導入該細胞株，觀察其抗損傷因子誘導的凋亡作用；同時套用GRP78蛋白及糖尿病發生相關的重要靶分子GAD65分別誘導調節性T細胞（CD4+CD25+FOXP3+T，Treg）克隆和GAD65致病性自身反應T細胞克隆，以NOD鼠為體內研究動物模型，通過體內外實驗探討Treg細胞克隆對GAD特異性T細胞和NOD鼠自身反應性T細胞的調節作用，以及對自身免疫性糖尿病胰島β細胞的保護機制, 從而為保護胰島細胞免受損傷和免疫調控治療IDDM提供新的策略。

結題摘要

I 型糖尿病（IDDM）是一種主要由T 細胞介導的器官特異性自身免疫病，本課題在前期研究免疫損傷與保護胰島β細胞工作的基礎上，以I 型糖尿病（IDDM）發生相關的抵抗因子葡萄糖調節蛋白（GRP78）、共抑制分子（PDL1），以及IDDM相關的免疫損傷重要靶分子GAD65 為切入點，構建了小鼠GRP78真核表達載體，並在CHO細胞中獲得穩定大量表達，為體內外實驗研究提供了表達蛋白；同時構建了GRP78慢病毒載體及其干擾載體。採用來源於非肥胖性糖尿病小鼠（NOD 小鼠）的NIT-1 β細胞株作為體外細胞研究模型，將糖尿病發生相關的抵抗因子GRP78 基因和PDL基因分別導入該細胞株，觀察了其抗損傷因子誘導的凋亡作用，研究證明轉染GRP78的NIT-1 β細胞株可抵抗損傷因子誘導的細胞凋亡作用，並首次證明可通過影響鈣離子通道發揮抗凋亡作用。 體外套用構建表達的GRP78 蛋白，LPS分別對小鼠骨髓來源DC的誘導作用，製備表達的GRP78蛋白可抑制骨髓來源的樹突狀細胞（DC）成熟，並可顯著抑制LPS誘導的骨髓來源的樹突狀細胞（DC）成熟，首次證明GRP78可誘導未成熟DC，即耐受性DC（Tol-DC）的形成，並建立了GRP78耐受性DC（GRP78-Dol-DC），GRP78-Dol-DC可誘導負性調節性T細胞（調節性T 細胞CD4+CD25+FOXP3+T，Treg）的產生，為體內外研究奠定了基礎；在前期研究證明GRP78在鏈脲佐菌素（STZ）損傷糖尿病小鼠胰島β細胞不同時期表達變化的基礎上，進一步研究GRP78對胰島β細胞的保護作用與免疫負調功能，首次以STZ和GAD65聯合誘導小鼠糖尿病模型，研究證明GRP78和PDL可延緩小鼠糖尿病的發生；以NOD小鼠為研究模型，研究轉染GRP78基因的胰島β細胞以及聯合套用GRP78-Dol-DC在體內誘導Treg細胞及其調節作用，對小鼠發病的影響，初步證明具有延緩小鼠糖尿病的發生，實驗動物尚在進一步觀察中。