《GNAS1低甲基化在胰島素瘤細胞增殖失控中作用的研究》是依託上海交通大學，由韓峻峰擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：GNAS1低甲基化在胰島素瘤細胞增殖失控中作用的研究
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：韓峻峰
- 依託單位：上海交通大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
GNAS1蛋白通過cAMP信號通路促進胰島細胞增殖，而細胞增殖失控是導致胰島素瘤發生的主要機制之一。本課題組前期研究證實胰島素瘤組織和細胞株中GNAS1表達均明顯升高；DNA甲基化晶片發現，胰島素瘤GNAS1基因甲基化水平明顯低於瘤旁組織。本研究將採用甲基化特異性PCR、RNA干擾等技術，在細胞、組織及動物水平進一步深入探討GNAS1低甲基化在胰島素瘤發生中的作用及其分子機制。同時考慮到血漿Gsα活性可較好反映瘤體GNAS1甲基化程度，故本研究還將初步探索其作為胰島素瘤生物標記物的可能性。通過本研究，將提出並驗證新的胰島素瘤發生機制：GNAS1低甲基化導致GNAS1高表達，進而持續激活cAMP信號通路，致胰島細胞增殖失控，最終導致胰島素瘤的發生。通過本研究將為胰島素瘤的早期診斷及治療提供新思路。
結題摘要
本課題組前期利用收集的胰島素瘤和瘤旁組織進行Infinium® HumanMethylation450 BeadChip晶片雜交，發現多個基因甲基化水平在兩組標本中存在差異。然後按照以下原則進行生物信息學分析：重點關注甲基化水平在癌組織中高於癌旁組織的位點（liu_Delta_Beta＞0），尤其是在細胞凋亡信號通路和胰島素信號通路中的基因（共篩選出13個興趣基因）。進一步用亞硫酸氫鹽測序擴增子（BSAS）法對上述基因的13個甲基化差異位點和PDX1的3個甲基化差異位點進行驗證分析。兩種方法得到的數據作相關分析，皮爾森相關係數為0.852，說明用BSAS方法驗證得到的CpG位點甲基化水平與晶片結果基本相符。Gata6在調控胰島細胞的分化調控的過程中發揮重要作用，亦參與體內一些腫瘤的形成，基因雜合突變可導致不同起病特徵的糖尿病。因此課題組對Gata6在胰島素瘤細胞株（MIN6）增殖和凋亡中的作用和機制進行深入研究。Gata6無論在mRNA還是蛋白水平在胰島素瘤瘤體組織表達均顯著高於瘤旁組織；siRNA干擾Gata6表達後，細胞發生凋亡較對照組顯著增加，細胞周期分析，處在S期細胞減少；過表達Gata6對MIN6細胞的細胞周期無明顯的影響，BrdU染色陽性率細胞無統計學差異，提示過表達Gata6對細胞的增殖無明顯的作用。棕櫚酸可使MIN6細胞產生內質網應激，ROS產生增加，Bcl-2/Bax比值減少。過表達Gata6可減少PA導致的ROS的產生，Bcl-2/Bax比值增加。因此推測Gata6在胰島素瘤中高表達，通過減少內質網應激所致瘤細胞凋亡，從而參與胰島素瘤發生機制。
