《FSH通過BimEL調控豬卵泡自噬的分子機制》是依託中國農業大學，由曾申明擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：FSH通過BimEL調控豬卵泡自噬的分子機制
- 依託單位：中國農業大學
- 項目負責人：曾申明
- 項目類別：面上項目
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
本項目將探索FSH通過BimEL變化調控豬卵泡自噬的分子機制。首先，以豬體外培養卵泡為對象，通過電鏡觀察、免疫共沉澱、蛋白檢測和磷酸化抑制劑，明晰FSH引起的卵泡自噬活性改變與BimEL及磷酸化BimEL的關係。其次，以顆粒細胞為模型，運用超表達和RNAi敲降技術研究BimEL調控自噬活性的機制，同時用基因定點突變技術探索BimEL磷酸化調控自噬活性的路徑，再結合細胞通路抑制劑明晰FSH通過BimEL變化調控細胞自噬活性的分子通路。然後，用RNAi、通路抑制劑結合特異磷酸化抗體檢測對以上路徑在卵泡體外發育中的功能進行驗證。最後，以豬卵巢為材料，通過電鏡觀察、免疫組化、蛋白檢測和免疫共沉澱等技術比較不同階段卵泡中BimEL、磷酸化BimEL和自噬的水平變化規律，確認目標通路是否調控體內卵泡的發育。研究結果將從自噬角度重新詮釋卵泡發育調控機制，還可能為卵泡發育控制技術或藥物研發提供新理論依據。
結題摘要
本項目以豬小腔卵泡（Ø2-5mm）中顆粒細胞為研究對象，探索了FSH調控細胞自噬的分子機制與生理功能。研究結果顯示，FSH通過與膜受體結合，激活PI3K/AKT/JNK信號通路，使轉錄因子c-Jun磷酸化並進入細胞核，上調自噬啟始核心蛋白Beclin-1表達，導致顆粒細胞自噬水平升高，並促進脂滴分解，產生游離膽固醇，最終促進孕酮分泌。這是FSH的一種新功能。同時，我們還發現FSH通過促進NF-κB抑制蛋白IκB 的表達和p65的胞質定位而抑制NF-κB活性，從而激活豬顆粒細胞中的JNK通路而增強自噬活性。此外，IGF-1也可以增強豬顆粒細胞的自噬水平，促進促凋亡蛋白BimEL降解，但具體機制不清。豬顆粒細胞在FSH、IGF-1、卵母細胞分泌因子作用下，BimEL皆發生磷酸化，並進一步泛素化，最終通過蛋白酶體和自噬路徑降解，但具體通路需要深入研究。褪黑素可以上調豬顆粒細胞中BimEL的泛素化水平而促進其降解，進而抑制凋亡發生。本研究發現了FSH的一種新功能，其對提高豬定時人工受精受胎率和家畜胚胎體外生產效率技術研發有重要指導價值。在此課題資助下，課題組已發表SCI收錄論文2篇，已投稿英文文章4篇；培養了3名博士和3名碩士研究生。
