《Exosomes：一種弓形蟲與宿主細胞間信息交流的新載體？》是依託山東大學，由周懷瑜擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：Exosomes：一種弓形蟲與宿主細胞間信息交流的新載體？
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：周懷瑜
- 依託單位：山東大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
Exosomes是由細胞內多囊泡體與質膜融合後分泌釋放到胞外的小囊泡，在細胞間信號傳遞中發揮重要作用，成為研究的熱點。目前對弓形蟲是否分泌exosomes的研究還是空白。在前期工作中，我們首次分離純化弓形蟲來源的exosomes（TgExo），經透射電鏡和流式細胞術得到初步證實，發現TgExo可誘導未感染的巨噬細胞活化並分泌細胞因子IL-12、TNF-α等，同時有p-p38 MAPK活化，推測TgExo可能通過MAPK信號通路引起巨噬細胞活化並發揮其功能。為證明假說，我們擬採用PCR、ELISA、Western Blot和蛋白質組學等技術方法，進一步驗證弓形蟲產生並外排exosomes，觀察TgExo體外激活巨噬細胞及其細胞因子分泌,建立不同蟲株來源的TgExo及其活化巨噬細胞前後蛋白表達譜；同時深入探討MAPK通路在TgExo活化巨噬細胞中的作用機制，為防治弓形蟲病提供新靶點和新思路。
結題摘要
弓形蟲是一種專性細胞內寄生的原蟲，呈世界性分布，能感染包括人在內的所有溫血動物，引起人獸共患弓形蟲病，嚴重威脅人類健康和畜牧業發展。目前有關弓形蟲是否分泌exosomes及其如何調控蟲體與宿主互作的研究還十分有限。本項目使用超高速離心、超濾濃縮和提取試劑盒相結合的方法，對弓形蟲不同蟲株來源的exosomes進行了分離、純化和鑑定；觀察了弓形蟲exosomes體外激活巨噬細胞，促進細胞因子分泌情況；觀察了弓形蟲exosomes對BALB/c小鼠的免疫作用；分析預測了弓形蟲exosomes的非編碼RNA，探討了MAPK信號通路在弓形蟲exosomes調控宿主免疫應答中的作用機制。本研究的成果主要有：（1）弓形蟲能夠產生並分泌exosomes，經透視電鏡、粒徑分析和Western blotting等方法均鑑定正確。（2）在體外，弓形蟲exosomes可以激活巨噬細胞，促進巨噬細胞分泌IFN-γ、IL-12和TNF-α，其機制可能與激活MAPK/JNK信號通路以及磷酸化JNK蛋白核轉移相關。（3）在體內，弓形蟲exosomes可以誘導BALB/c小鼠產生體液免疫和細胞免疫應答，為抵抗弓形蟲速殖子攻擊提供部分免疫保護力。（4）對不同蟲株來源的弓形蟲exosomes所包含的非編碼RNA進行高通量測序，並分析預測其中miRNA的相關靶基因及潛在靶標信號通路；初步建立了弓形蟲exosomes誘導巨噬細胞前後的蛋白表達譜。本研究成果有助於了解弓形蟲exosomes調控寄生蟲-宿主的相互作用機制，為防治弓形蟲病提供新的候選疫苗和藥物靶點。
