《EphrinA調控Müller細胞誘導分化為感光細胞的研究》是依託復旦大學，由方媛擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：EphrinA調控Müller細胞誘導分化為感光細胞的研究
- 依託單位：復旦大學
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：方媛
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
視網膜色素變性是臨床常見的遺傳性致盲性眼病，目前缺乏有效的治療方法。研究發現，視網膜的Müller細胞在特定條件下，可以去分化成視網膜幹細胞，重新進入細胞周期，增殖並分化為視網膜感光細胞。本研究旨在探究視網膜內源性環境因素對Müller細胞增殖及分化能力的影響。最近的研究表明，ephrinA分子對成年哺乳動物中樞神經幹細胞增殖分化能力具有抑制性的調控作用，本人的前期工作也證實ephrinA對成年睫狀體上皮細胞來源的視網膜幹細胞的增殖和分化也具有抑制性調控作用，本課題擬通過敲除ephrinA2和ephrinA3雙基因後，研究視網膜色素變性模型- - rhodopsin基因敲除鼠的Müller細胞的增殖及再生為感光細胞的情況，從而闡明視網膜內源性環境因素ephrinA對Müller細胞增殖及分化能力的調控作用，並進一步探討其作用的分子機制，為視網膜色素變性尋找新的治療途徑。
結題摘要
視網膜色素變性是臨床常見的不可逆致盲性眼病，主要病理特點是感光細胞的變性凋亡，目前對視網膜色素變性缺乏有效的治療方法。近年來幹細胞的研究發現Müller細胞可作為內源性視網膜幹細胞的來源，而本研究旨在研究內源性分子ephrinA2/A3對Müller細胞增殖分化為感光細胞的調控作用。本研究首先利用western blot檢測發現隨著視網膜發育成熟，ephrinA2、A3的表達逐漸上調，其表達趨勢與Müller細胞增殖能力喪失的趨勢相一致。並且免疫組化證實ephrinA2、A3在Müller細胞上均有表達，提示ephrinA2/A3可能參與Müller細胞增殖分化能力的調控。我們利用ephrinA2/A3基因敲除小鼠和野生型小鼠為模型，體外培養兩種小鼠的Müller細胞，並且用BrdU增殖實驗證實ephrinA2/A3基因敲除小鼠的Müller細胞具有更強的增殖能力。RT-PCR檢測發現，ephrinA2/A3基因敲除小鼠的Müller細胞表達更高水平的幹細胞標記物，如math1、math5、wnt1、wnt3a等。我們將兩種Müller細胞培養成神經球後，再利用神經分化實驗檢測Müller幹細胞在體外分化為感光細胞的能力，證實Müller幹細胞在體外可以分化為感光細胞，並且ephrinA2/A3基因敲除小鼠的Müller幹細胞分化為感光細胞的數量更多效率更高。我們利用視網膜色素變性的動物模型rhodopsin-/-作為疾病模型，並且雜交繁育(rho-/-ephrinA2-/-A3-/-三基因敲除小鼠)，體內實驗比較其與rho-/-小鼠體內Müller細胞增殖分化為感光細胞的能力。首先通過OCT活體觀察同日齡的兩種小鼠的外核層厚度發現三基因敲除小鼠的外核層厚度更厚，並且用冰凍切片測量外核層厚度發現了一致的結果。BrdU活體標染髮現三基因敲除小鼠的視網膜內增殖細胞數量明顯高於rho-/-小鼠，而且發現在核心層內有BrdU/Ki67共標染的細胞，推測為增殖的Müller細胞，並且觀察到外核層有BrdU陽性的感光細胞，推測可能為Müller細胞增殖分化感光細胞並移行到外核層。總之，該研究從體內及體外證實了ephrinA2/A3對Müller細胞增殖及分化能力的抑制性作用，從而加深了對Müller細胞增殖分化機制的理解，為視網膜色素變性疾病的治療發現了一個新的治療靶點。
