《ERα/ERβ介導Ginsenoside Rh2激活TNFα轉錄和誘導腫瘤細胞凋亡機制》是依託中南大學，由羅志勇擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：ERα/ERβ介導Ginsenoside Rh2激活TNFα轉錄和誘導腫瘤細胞凋亡機制
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：羅志勇
- 依託單位：中南大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
運用cDNA晶片與蛋白質組學等技術，率先鑑定到20(S)G-Rh2抗腫瘤生物效應關鍵分子TNFα,且發現並確認ERα/ERβ在介導G-Rh2上調TNFα並誘導細胞凋亡中起決定作用。本研究以乳腺癌細胞系MCF-7(ERα+/ERβ+)及MDA-MB-231(ERα-/ERβ+)為模型，運用siRNA與基因過表達等技術，探討G-Rh2靶向ERα/ERβ對其啟動子CpG島甲基化、蛋白質合成與降解調控；採用TAP結合二維電泳與質譜等技術，分離G-Rh2誘導ERα/ERβ變構後募集的轉錄輔因子、信號分子及其新成員；套用ChIP、EMSA、位點缺失突變等方法，鑑定上述輔因子-ERα/ERβ-Sp1/AP1複合物與TNFα啟動子區Sp1、AP1位點的互作。揭示ERα和ERβ如何介導G-Rh2正調控TNFα的啟動子報告活性、mRNA 和蛋白質表達，進而誘導腫瘤細胞凋亡的轉錄調控與信號轉導新機制。
結題摘要
本項目運用cDNA晶片與蛋白質組學等技術，率先鑑定到20(S)G-Rh2抗腫瘤生物效應關鍵分子TNFα,且發現並確認ERα/ERβ在介導G-Rh2上調TNFα並誘導細胞凋亡中起決定作用。套用報告基因活性、ERα和/或ERβ過表達與基因沉默實驗並結合Western blot分析，闡明了ERα和/或ERβ介導20(S)-G-Rh2誘導腫瘤細胞凋亡的信號機制。 ERβ siRNA 能明顯下調野生型TNFα啟動子pGL4-TNF(1237)-Luc螢光素酶報告活性，從正、反兩方說明20(S)-G-Rh2誘導ERβ上調激活了TNFα的轉錄過表達；凋亡蛋白的Western blot分析表明，G-Rh2呈濃度依賴性誘導細胞凋亡核心成員胱天蛋白酶(caspase)活性型Caspase 9(Cleaved )及其切割底物－PARP（poly ADP-ribose polymerase）的過表達，抑制抗凋亡蛋白Bcl-xl、Survivin表達；ERα拮抗劑ICI182，780呈濃度依賴性協同G-Rh2下調ERα表達，上調ERβ，增強誘導Caspase 9(Cleaved)、PARP(Cleaved)過表達，抑制Bcl-xL、Survivin表達；ERβ拮抗劑PHTPP呈濃度依賴性拮抗G-Rh2誘導的Caspase 9(Cleaved )、PARP過表達，PHTPP能明顯降解ERβ，下調ERβ表達，阻斷G-Rh2 激活的ERβ的信號轉導，而ERα仍受到G-Rh2誘導表達下調。未發現文獻報導ERβ下調ERα作用，說明G-Rh2可直接誘導ERα表達下調，並非由G-Rh2誘導ERβ過表達下調ERα所致；Western blot 分析表明，G-Rh2呈濃度依賴性誘導乳腺癌MCF-7細胞ERα表達下調、ERβ上調，激活TNFα過表達，同時抑制Bcl-xL及Cyclin D1表達。同時，以乳腺癌細胞系MCF-7(ERα+/ERβ+)及MDA-MB-231(ERα-/ERβ+)為模型，運用siRNA與基因過表達等技術，探討G-Rh2靶向ERα/ERβ對其啟動子CpG島甲基化、蛋白質合成與降解調控。闡明了ERα和ERβ如何介導G-Rh2正調控TNFα的啟動子報告活性、mRNA 和蛋白質表達，以及誘導腫瘤細胞凋亡的轉錄調控與信號轉導新機制。
