《EGFR在人外泌汗腺三維模型構建中的作用及機制》是依託汕頭大學，由李海紅擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：EGFR在人外泌汗腺三維模型構建中的作用及機制
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：李海紅
- 依託單位：汕頭大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
汗腺的重建對於恢復大面積燒傷引起的泌汗功能降低有重要意義。三維培養模式（3D）是與生理相關的培養模式，它捕獲了建立組織形態發生的動態和互動的信號。體外單層培養技術、皮膚標本檢測和動物實驗研究發現EGFR在汗腺發育、功能維持和汗腺腫瘤的發生中起著重要作用。我們利用細胞外基質成功地構建了汗腺細胞體內外3D培養模型，同時在預實驗中發現：用EGFR抑制劑後，汗腺細胞不能重構3D結構。基於上述結果我們提出EGFR是細胞外基質誘導汗腺細胞重構汗腺三維結構的核心成份。EGFR活化後，又激活下游的信號通路，引起基因轉錄，細胞增殖、分化、凋亡和極性，從而重構汗腺三維結構的假說，本項目擬套用免疫組織化學、RT-PCR、western、免疫共沉澱、基因轉染、RNAi、RNAi補救實驗等手段和方法研究EGFR在汗腺3D模型構建中的作用及機制，其結果將為汗腺的修復和再生提供未來發展的新模型、新策略和基準數據。
結題摘要
外泌汗腺的重建對於恢復大面積燒傷引起的泌汗功能障礙具有重要意義。三維培養模式（3D）捕獲了組織形態結構發生的動態和互動信號。我們利用細胞外基質對細胞的誘導分化作用，重構了汗腺的3D結構，並對EGFR在汗腺三維重構中的作用和機制進行了研究。結果顯示：3D重構的汗腺從形態(類球狀或類管狀結構，具有腔和基底膜)、細胞分化（分化成類分泌部和導管部；5種細胞類型）、標誌抗原表達（K5/7/8/14/15、α-SMA、CEA）、細胞連線蛋白（ZO-1/2、claudin-1、橋粒蛋白1/2和上皮鈣連線蛋白）、細胞極性蛋白（β-cateinin、collagen Ⅳ、 ZO-1、F-actin）功能蛋白表達（Na-K-ATPase β、Na-K-2Cl-共轉運體1、水通道蛋白5）、血管營養（CD31、α-SMA）、神經支配（蛋白基因產物9.5， 酪氨酸羥化酶，血管活性腸肽）、泌汗功能上，均類似於在體汗腺。EGFR在汗腺的3D重構中起著重要作用：汗腺3D結構形成早期，抑制EGFR（1μM AG1478）或β1-integrin1(10μg/ml β1-integrin功能阻斷抗體)或RAS/ERK(1μM U0126)通路，汗腺細胞均不能重構3D汗腺；去除EGF後，不影響汗腺3D結構的形成；汗腺細胞聚集後，AG1478對汗腺3D結構的形成無明顯影響。EGFR通過β1-integrin途徑，而非傳統的受體-配體途徑激活，隨後通過下游的RAS/ERK通路，引起細胞的粘附和聚集、增殖、自噬、分化；EGFR對凋亡無影響。本研究為汗腺的發育、細胞分化和調控、以及再生提供了新模型、新思路和新策略。
