《EF手型鈣結合蛋白S100A6在肺腺癌侵襲和轉移作用機制的研究》是依託中國人民解放軍第四軍醫大學，由南岩東擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：EF手型鈣結合蛋白S100A6在肺腺癌侵襲和轉移作用機制的研究
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：南岩東
- 依託單位：中國人民解放軍第四軍醫大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
EF手型鈣結合蛋白S100A6介導的信號通路參與腫瘤的多種生物學過程，且與腫瘤的侵襲、轉移和預後密切相關。我們前期的研究發現，在具有侵襲及轉移能力的肺腺癌細胞中S100A6蛋白明顯高表達。因此，本課題擬首先利用免疫組織化學、Westernblot和RT-PCR技術明確肺腺癌細胞S100A6蛋白的表達與臨床、病理、預後的相互關係；隨後以高侵襲性肺腺癌細胞系A549為研究對象，針對S100A6基因的小干擾RNA(siRNA)肺腺癌細胞的體外轉染，觀察其對靶向基因表達的抑制效應；進一步利用鼠模型再現肺腺癌轉移瘤生物學行為，製備S100A6-siRNA納米控釋系統，病灶區的定向基因導入，通過比較治療與對照組抑瘤率、微觀形態學、荷瘤小鼠生存期，評價其對腫瘤的治療的效果。本實驗旨在明確S100A6基因表達在肺腺癌侵襲與轉移作用機制，從而為其轉移預警及治療提供翔實的理論基礎和實驗依據。
結題摘要
EF手型鈣結合蛋白S100A6極有可能通過某種生物學途徑介導了肺腺癌的侵襲與轉移。本研究通過分子、細胞、組織及動物模型等實驗，旨在明確S100A6基因表達在肺腺癌發病過程中的作用機制。首先套用生物信息學技術，預測S100A6結構、性質、功能和生物信號通路，結果表明S100A6蛋白為酸性、小分子、穩定性蛋白質，存在多個結構域及多種翻譯後修飾，通過Ca2+ binding作用激活激酶對該蛋白的磷酸化修飾，使該蛋白質與其他蛋白質相互作用，行使功能；S100A6蛋白存在鈣感測器、介導細胞內鈣信號釋放，調控細胞周期及細胞分化，同時可能刺激Ca2+依賴的胰島素釋放；S100A6蛋白通過與p53蛋白四聚體結構域相互作用調控腫瘤細胞的生長和凋亡；通過泛素連線酶導致β-連環蛋白降解，促進腫瘤發生。其次，套用免疫組織化學、Western blot和RT-PCR技術檢測了98例人肺腺癌組織S100A6基因的表達。結果顯示S100A6基因的表達與肺腺癌患者年齡、性別、吸菸等因素無相關性(P＞0.05)，而與腫瘤大小、病理分級、淋巴結轉移、胸水、腫瘤分期及生存期密切相關(P＜0.05)，提示S100A6是肺腺癌重要預警靶點。隨後以高侵襲性肺腺癌細胞系A549為研究對象，慢病毒載體介導，針對S100A6基因的小干擾RNA(siRNA)的肺腺癌細胞體外轉染，觀察其對靶向基因表達的抑制效應，使用MTT法檢測細胞的增殖，Transwell實驗檢測細胞的遷移和侵襲能力，流式分析法檢測細胞周期和細胞凋亡。結果顯示 S100A6基因在肺腺癌細胞系A549明顯高表達（P＜0.05）；siRNA組腫瘤細胞增殖、侵襲及遷移能力明顯減弱(P＜0.05)，而過表達組腫瘤細胞增殖細胞增殖能力、侵襲及遷移能力明顯增強(P＜0.05)；S100A6基因干擾後G2期肺腺癌細胞發生阻止，DNA合成抑制，細胞的凋亡明顯增加，提示S100A6可是肺腺癌重要的治療靶點。進一步建立鼠肺腺癌轉移瘤模型，病灶區的定向RNA干擾基因或過表達基因導入，觀察各生物學指標，結果S100A6干擾基因導入可明顯減輕轉移瘤負荷，可顯著降低肺腺癌的侵襲和轉移能力(P＜0.05)。總之，本研究結果表明S100A6可顯著影響肺腺癌的發生、發展及轉移及預後，有望作為肺腺癌診斷、治療及預後判斷的分子靶標。
