《Cyclophilin D在FFA誘導內皮細胞壞死性凋亡中的機制研究》是依託上海交通大學，由李岩擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：Cyclophilin D在FFA誘導內皮細胞壞死性凋亡中的機制研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：李岩
- 依託單位：上海交通大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
Necroptosis是一種不同於凋亡和壞死的新型細胞死亡途徑，前期研究提示它是膿毒症淋巴液致內皮細胞損傷的主要方式， 淋巴液中FFAs的脂毒性作用是關鍵因素。已知線粒體中CypD與ANT結合可使MPTP開放並導致細胞死亡，因此我們推測CypD是FFAs誘導內皮細胞壞死的重要靶點，具體機制有待闡明。課題組在此基礎上，利用活細胞工作站動態檢測線粒體膜上MPTP開放情況；套用nec-1阻斷necroptosis信號通路，研究RIP對內皮細胞壞死的影響；套用siRNA技術下調CypD蛋白的表達水平，並建立CypD蛋白高表達內皮細胞模型，研究CypD在內皮細胞壞死中的作用機制；套用表達譜晶片分析篩選FFAs調控的下游靶基因，尋找RIP與CypD之間相關信號通路。本研究旨在全面闡明FFAs致內皮細胞壞死性凋亡的分子機制，為尋找新的膿毒症治療途徑提供理論基礎和科學依據。
結題摘要
本課題組研究發現淋巴循環在膿毒症大鼠的炎症反應當中具有重要的作用。課題組一直從事淋巴液與膿毒症發病機制之間關係的研究工作，通過我們前期研究中成功建立的膿毒症大鼠盲腸結紮穿孔(Cecal Ligation and Puncture,CLP)動物模型以及大鼠胸導管淋巴液置管引流技術，並且該方法已發表在LYMPHOLOGY雜誌上，得到了國際同行的認可。從我們的研究結果中可以證明膿毒症大鼠淋巴液對血管內皮細胞是有毒性的，並且這種毒性物質能夠導致內皮細胞的壞死而不是過去報導的凋亡。我們通過MTT方法檢測了內皮細胞的存活率，並通過流式細胞儀和電鏡方法檢測了內皮細胞損傷的情況，均發現內皮細胞發生壞死。我們又檢測了內皮細胞壞死性凋亡的兩個關鍵受體相互作用蛋白1（receptor-interacting protein 1，RIP1 ）和RIP3的表達情況，在膿毒症大鼠淋巴液作用下，內皮細胞中RIP1和RIP3的基因表達水平顯著升高，因而從細胞形態和基因水平均支持我們的推測，膿毒症大鼠淋巴液誘導了內皮細胞的程式性壞死。我們已知線粒體中Cyclophilin D(CypD)蛋白與腺核苷酸移位酶(adenine nucleotide translocator ANT)結合可使MPTP開放並導致細胞死亡，因此我們推測CypD有可能是FFAs誘導內皮細胞壞死的重要靶點。由於獲得的是一年期的小額探索項目，在實驗設計上與面上項目研究內容略有改變，課題組在研究過程當中首先重點探討了淋巴循環在膿毒症發病機制當中發揮了何種作用。我們主要通過兩個方面實驗進行闡述。首先我們利用CLP方法造膿毒症大鼠模型，然後分不同時間點再結紮大鼠的胸導管，觀察大鼠的術後死亡率明顯增高，並且死亡的時間提前，和對照組比較有顯著性差異。另外，我們對膿毒症大鼠胸導管採取了置管引流手術，在造模同時進行的引流手術大鼠的死亡率沒有顯著變化，但是在造模後6h再進行的引流手術大鼠死亡率明顯下降。本研究再次證實了淋巴液在膿毒症發病機制中的重要作用。我們繼續將膿毒症大鼠淋巴液作用於臍靜脈內皮細胞後通過CCK8檢測可以發現內皮細胞的損傷。通過流式細胞儀檢測可以發現膿毒症大鼠淋巴細胞在繼續進行線粒體損傷的研究當中，由於時間有限還沒有得到很好的結果，這一部分實驗將在之後繼續進行深入的研究。
