《Claudin-3：腫瘤壞死因子α調控下頜下腺緊密連線的分子靶點》是依託北京大學，由俞光岩擔任負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：Claudin-3：腫瘤壞死因子α調控下頜下腺緊密連線的分子靶點
- 項目負責人：俞光岩
- 依託單位：北京大學
- 項目類別：面上項目
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
緊密連線是介導上皮細胞物質經旁細胞途徑轉運的蛋白複合體，但對其在下頜下腺中的作用了解甚少。本項目以腫瘤壞死因子α（TNF-α）誘導的下頜下腺炎症反應為主線，緊密連線蛋白claudin-3為重點，採用免疫印跡、免疫螢光、基因敲低或過表達等方法證實claudin-3在下頜下腺緊密連線中的作用；在TNF-α誘導的大鼠下頜下腺炎和SMG-C6細胞上觀察緊密連線蛋白表達、分布和功能的變化，在器官、細胞和分子水平證實claudin-3是TNF-α特異性調控的緊密連線靶分子；以ERK1/2和NF-κB通路為中心，探討TNF-α調控轉錄因子Egr-1和slug進而影響claudin-3表達和功能的信號轉導途徑。本研究將豐富緊密連線介導下頜下腺分泌的理論，揭示claudin-3在下頜下腺的生理功能，明確TNF-α調控claudin-3的分子機制，並為探討以緊密連線為靶點防治下頜下腺炎症性疾病提供新的思路。
結題摘要
緊密連線是介導上皮細胞物質經旁細胞途徑轉運的蛋白複合體。腫瘤壞死因子α（TNF-α）在唾液腺炎性疾病的發病中起重要作用，但對其在下頜下腺中調節緊密連線屏障的作用了解甚少。我們發現TNF-α可降低大鼠下頜下腺細胞系SMG-C6的跨上皮電阻（TER），增加FITC-葡聚糖滲出量。TNF-α引起緊密連線蛋白claudin-3表達減少和膜分布降低，而claudin-1、claudin-4和β-catenin的表達和分布不受影響。在SMG-C6細胞過表達claudin-3可增加TER值，降低FITC-dextran的通過率；而採用shRNA敲低claudin-3表達，則降低TER值，增加FITC-dextran的通過率。TNF-α作用於過表達claudin-3的細胞可降低claudin-3的表達，升高旁細胞途徑通透性，提示claudin-3是構成下頜下腺上皮細胞屏障功能的重要分子，在TNF-α介導的下頜下腺旁細胞通透性升高中claudin-3發揮了關鍵作用。TNF-α增加細胞外信號調節激酶（ERK1/2）磷酸化和轉錄因子slug的表達，預孵育ERK1/2激酶抑制劑PD98059和U0126可以抑制TNF-α引起的TER下降和FITC-dextran通過率升高，並逆轉TNF-α引起的claudin-3表達下降和膜分布改變，抑制TNF-α引起的slug表達。在SMG-C6中過表達轉錄因子slug可以降低claudin-3的表達，使用shRNA敲低slug，claudin-3表達升高，螢光素酶報告基因實驗顯示，slug可以結合到claudin-3啟動子區域的E-box結合位點，發揮轉錄抑制作用。CHIP實驗顯示，TNF-α可以通過ERK1/2途徑促進slug對claudin-3的轉錄抑制作用。對人正常下頜下腺組織進行體外孵育，TNF-α可降低claudin-3的表達，升高slug的表達，提示TNF-α亦可經轉錄因子slug對人下頜下腺緊密連線蛋白claudin-3進行調控。我們的研究表明TNF-α經ERK1/2通路和轉錄因子slug選擇性調控緊密連線蛋白claudin-3表達及分布，從而增加旁細胞通透性。本研究豐富了緊密連線介導下頜下腺分泌的理論，揭示claudin-3在下頜下腺分泌調控中的作用，並為以緊密連線蛋白為靶點防治下頜下腺炎症性疾病提供了新的思路。
