《ClC-3氯通道調控多發性骨髓瘤細胞周期及機制的研究》是依託中山大學，由湯勇波擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：ClC-3氯通道調控多發性骨髓瘤細胞周期及機制的研究
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：湯勇波
- 依託單位：中山大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
我們先前發現ClC-3氯通道影響cyclins/CDKIs平衡和Erk1/2，Akt磷酸化，提示ClC-3能作為較上游細胞周期促進因子調控細胞周期。預試驗結果顯示多發性骨髓瘤病人漿細胞ClC-3顯著高表達，siRNA沉默ClC-3可抑制多發性骨髓瘤細胞增殖並導致腫瘤細胞周期G1/S阻滯。後續研究擬探討ClC-3參與骨髓瘤細胞增殖的分子機制，試驗利用酵母雙雜交尋找與ClC-3結合且在細胞周期進程中起關鍵作用的靶分子，確定ClC-3序列上的功能位點，驗證ClC-3通過該位點結合靶分子共同促進腫瘤細胞周期G1/S轉換。試驗將ClC-3高表達，ClC-3表達缺失，ClC-3功能位點突變的多發性骨髓瘤細胞系接種SCID小鼠，在體內觀察ClC-3對多發性骨髓瘤細胞增殖和細胞周期的影響。研究將從氯通道這一新角度深入認識多發性骨髓瘤發病機理，為評估ClC-3氯通道可否作為治療該病的新靶點提供依據。
結題摘要
本研究採用細胞培養、膜片鉗、雷射共聚焦、流式細胞儀和免疫印記，siRNA沉默等手段和在體和細胞水平的多發性骨髓瘤細胞上，首次發現： 1.ClC-3能促進在MM細胞增殖，沉默ClC-3能明顯抑制MM細胞增殖，ClC-3能促進在MM細胞周期G1/S轉換，沉默ClC3氯通道阻止細胞周期從G0/G1期進入S期，阻止DNA的合成, 沉默ClC-3抑制細胞周期調控蛋白cyclin D1和cyclinE表達，增加P21, P27表達。沉默ClC-3抑制ERK1/2的磷酸化，沉默ClC-3抑制Akt 308、473位點和GSK3β的ser 9位點磷酸化。說明ClC-3通過這些磷酸化信號通路影響細胞周期G1/S轉換。 2. 多發性骨髓瘤病人來源的漿細胞中ClC-3的表達顯著高於正常人來源的漿細胞。 3. Src蛋白酪氨酸激酶參與了容積調節性ClC-3氯通道的調節，Src蛋白酪氨酸激酶與ClC-3蛋白相互作用並磷酸化ClC-3蛋白的284，572酪氨酸位點可能是其重要的調節機制。 4. 在體水平驗證ClC-3促進MM細胞增殖和細胞周期調控的理論，證實ClC-3是促進多發性骨髓瘤細胞惡性增殖和推動細胞周期進程的重要分子，從氯通道角度為開發治療多發性骨髓瘤的藥物提供實驗依據。
