《CREB-miR-212/132-TORC1-CREB信號通路反饋性調控網路在骨癌痛維持中的作用》是依託南京大學，由馬正良擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：CREB-miR-212/132-TORC1-CREB信號通路反饋性調控網路在骨癌痛維持中的作用
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：馬正良
- 依託單位：南京大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
我們的研究結果發現脊髓背角NMDA受體在包括骨癌痛在內的多種疼痛中起重要作用。NMDA受體激活後的下游信號分子CREB蛋白可以引起多種基因表達從而使其信號持續發揮作用，在疼痛過程中起重要作用。我們的預實驗也發現骨癌痛時小鼠脊髓背角磷酸化的CREB蛋白表達顯著增加。TORC1蛋白是CREB的共激活分子。最近有研究發現miR212、miR132可以放大TORC1-CREB信號通路的功能。本研究在谷氨酸誘導離體脊髓背角神經元CREB信號通路模型和小鼠骨癌痛模型上，使用RNAi技術抑制CREB、TORC1基因表達，用鈣調磷酸酶抑制劑ISA247下調TORC1活性以及反義鎖核苷酸抑制miR-212和miR-132表達，通過行為學、分子生物學等技術，探討CREB-miR-212/132-TORC1-CREB信號通路在骨癌痛維持中的作用,為臨床控制骨癌痛提供新的思路。
結題摘要
骨癌痛是最常見的難治性癌痛之一，對其發病機制及防治的研究至今仍未取得突破。本研究在小鼠骨癌痛模型上，使用CREB基因RNA干擾腺病毒載體、miR-212/132的反義鎖核酸、TORC1（CREB轉錄共激活因子1，CRTC1）基因RNA干擾腺病毒載體的方法，觀察骨癌痛小鼠痛行為學和脊髓水平CREB、CRTC1、miR-212/132表達變化規律，探討CREB-miR-212/132-TORC1-CREB信號通路在脊髓水平骨癌痛形成和發展中的作用，為臨床控制癌痛提供新的思路和方法。我們的研究結果顯示(1)在骨癌痛形成過程中，脊髓水平CRTC1 、p-CREB、miR-212/132、BDNF在接種腫瘤細胞7d後表達量明顯增加。提示CRTC1、p-CREB、miR-212/132及BDNF在骨癌痛中起關鍵作用。(2)鞘內注射CRTC1基因RNA干擾腺病毒可以改善小鼠骨癌痛，同時降低脊髓水平p-CREB、NR2B、BDNF、miR-212/132的表達，並能降低骨癌痛引起的脊髓背角星形膠質細胞的增殖與活化。(3)從骨癌痛造模後第14天開始，重複鞘內注射CREB基因RNA干擾腺病毒載體，骨癌痛組小鼠痛行為學明顯改善，CRTC1、NR2B、BDNF、miR-212/132的表達均有不同程度下調，免疫螢光結果顯示，鞘內注射CREB基因RNA干擾腺病毒可以抑制骨癌痛引起的脊髓背角星形膠質細胞的增殖與活化，表現為GFAP陽性細胞數量減少與螢光強度降低。(4)鞘內注射miR-132反義鎖核酸可緩解骨癌痛小鼠痛行為學，並抑制脊髓水平BDNF和GFAP的上調，提示脊髓水平miR-132/BDNF/星形膠質細胞信號通路在小鼠骨癌痛維持中的作用。(5)重複鞘內注射miR-212反義鎖核酸通過抑制脊髓水平p-CREB的表達緩解骨癌痛小鼠痛行為學。提示miR-212/p-CREB信號通路在小鼠骨癌痛維持中的作用。(6)在細胞水平，谷氨酸處理神經元可表現p-CREB表達增加，CRTC1基因RNA干擾腺病毒僅可降低CRTC1表達水平；而CREB基因RNA干擾腺病毒可降低CREB及CRTC1 mRNA表達，但不影響NR2B的磷酸化。該課題揭示脊髓水平CREB-miR212/132-CRTC1-CREB信號轉運通路在骨癌痛形成和發展中的作用，為臨床防治癌痛提供理論依據。
