CLEIA

CLEIA常用的底物為魯米諾或其衍生物。魯米諾的氧化反應在鹼性緩衝液中進行，通常以0.1mol/LpH8.6Tris緩衝液作底物液，魯米諾和H2O2在無HRP催化時也能緩慢自發發光，而在最後光強度測定中造成空白干擾，因而宜分別配製成2瓶試劑溶液，只在用前即刻混合。

HRP標記的化學發光酶免疫測定

HRP催化魯米諾氧化的反應可被某些酚試劑（如鄰－碘酚）或螢火蟲螢光素酶等加強。加強劑的作用是增強發光和延長發光時間，由此可提高敏感度。

AP標記的化學發光酶免疫測定

在以AP為標記酶的化學發光酶免疫測定中，套用的底物為adamantyldioxetasephosphate，有不少衍生物的商品試劑如PPD可供套用。發光反應的反應式如下：