《CD177在ANCA相關小血管炎發病機制中的作用》是依託北京大學，由胡楠擔任負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：CD177在ANCA相關小血管炎發病機制中的作用
- 項目負責人：胡楠
- 依託單位：北京大學
- 項目類別：青年科學基金項目
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
ANCA相關小血管炎的發病機制尚不明確。目前認為ANCA自身抗原在炎症狀態下表達於中性粒細胞膜表面，被ANCA識別並引起中性粒細胞呼吸爆發，導致臨近血管內皮損傷，組織病理表現為壞死性血管炎。活性氧自由基的非特異性鞏櫃損傷局限於中-小血管，提示中性粒細胞粘附、游出血管內皮的過程是發病的重要階段。蛋白酶3（Proteinase 3, PR3）是ANCA自身抗原，以CD177為受體表達於中性粒細胞膜表面。CD177屬糖蛋辯糠滲嚷白（PECAM1配體），具有粘附分子功能戀習促跨。我們的前期工作證實CD177在AAV患者中表達增加。根據CD177與PECAM1的配體關係，我們推測1）CD177+中殃廈迎性粒細胞在炎症發生時，粘附、游出血管內皮更迅速；2）在中性粒細胞游出過程中，CD177與PECAM-1的結合，導致其配體PR3的釋放，並在ANCA作用下，加重內皮細胞損傷。
結題摘要
在AAV中，PR3是ANCA主要的抗原之一。CD177為PR3在中性粒細胞表面受體，而且跨灑提CD177被證實可以和PECAM-1結合。本研究是為了探究PECAM-1與中性粒細胞表面分子CD177的相互作用對中性粒表面PR3表達的影響，進而探究在AAV中其相互作用對於ANCA導致的中性粒細胞的活化和內皮細胞損傷的影響。將提取的PMN與PECAM-1孵育，用流式細胞術檢測PECAM-1與CD177的結合對細胞膜PR3表達量的影響，用ELISA檢測上清中游離PR3的含量。PECAM-1與中性粒細胞預孵育後，加入PR3-ANCA陽性IgG，以DHR實驗檢測細胞內院姜采活性氧釋放水平來反應呼吸爆發程度，用ELISA檢測上清中乳鐵蛋白水平來評估中性粒細胞脫顆粒水平。對中性粒細胞進行磁珠篩選得到CD177陰性的中性粒細胞，評價PECAM-1對由PR3-ANCA誘導的中性粒細胞脫顆粒的抑制作用。用ICAM-1含量反應腎小球內皮細胞的芝虹堡活化和損傷水平。將與PECAM-1預孵育的中性粒細胞與原代腎小球內皮細胞共孵育，並且加PR3-ANCA陽性IgG刺激，用ELISA檢測上清中ICAM-1含量，以反應PECMA-1對PR3-ANCA介導的中性粒細胞活化和內皮損傷的作用。CD177與PECAM-1的結合水平隨著CD177水平增加而升高。PECAM-1與中性粒細胞孵育之後，中性粒細胞膜上PR3表達量降低，並且存在劑量依賴性。PECAM-1對中性粒細胞預孵育可以顯著可以減輕顯著降低中性粒細胞呼吸爆發和脫顆粒水平。PECAM-1預孵育對PR3-ANCA陽性IgGs誘導的中性粒細胞呼吸爆發在CD177陽性細胞中具有保護作用。PR3-ANCA陽性IgG和中性粒細胞與內皮細胞作用可導致上清中ICAM-1水平顯著升高，而PECAM-1與中性粒細胞的預孵育可以明顯降低ICAM-1在上清中的水平。PECAM-1與CD177相互作用可以降低膜PR3水平，從而減輕PR3-ANCA導致的中性粒細胞的活化和內皮細胞的損傷，這對於PR3-ANCA陽性的AAV治療可能具有臨床意義。
