《CD147影響抗VEGFR藥物療效的機制研究》是依託中南大學，由賀毅憬擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：CD147影響抗VEGFR藥物療效的機制研究
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：賀毅憬
- 依託單位：中南大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
使用抗血管內皮細胞生長因子受體（VEGFR）藥物治療惡性皮膚腫瘤是目前臨床治療的新趨勢，但同時也存在療效不佳毒副反應較大的問題。研究證實，VEGFR及其配體VEGF在腫瘤細胞中的表達受金屬蛋白酶誘導因子CD147的調控。CD147在多種腫瘤細胞膜上的增高表達與腫瘤的發生髮展和耐藥相關。CD147可能是影響抗VEGFR藥物療效的重要因素。本研究中，我們將首先了解CD147、VEGF和VEGFR在體內外皮膚惡性黑素瘤和鱗癌細胞中的表達和共存情況；再利用siRNA、基因定點突變、腫瘤裸鼠模型和惡性皮膚腫瘤組織樣本明確CD147在體內外對VEGF和VEGFR表達的影響；之後，對體外惡性皮膚腫瘤細胞以及腫瘤裸鼠模型進行抗VEGFR藥物（蘇尼替尼和貝伐單抗）處理，並觀察CD147對VEGF和VEGFR表達以及腫瘤發展侵襲的影響。本項目的開展將最終明確CD147在影響抗VEGFR藥物療效中的作用和機制。
結題摘要
背景：蘇尼替尼作為一類絡氨酸激酶抑制劑，可通過抑制VEGFR及c-kit影響腫瘤的增殖及侵襲轉移，也逐漸被發現在黑素瘤治療中的潛在作用。普奈落爾作為腎上腺素能非選擇性β-受體抑制劑，近期也被大量報導出對腫瘤的抑制作用及作為輔助用藥協同抗腫瘤藥物的抗腫瘤療效。 主要研究內容：1. 不同濃度普萘洛爾及蘇尼替尼單獨或聯合處理A375及P8黑素瘤細胞株多個時間點，MTS/PMS法檢測細胞活力，計算細胞生存率及IC50值，並摸索最佳藥物聯合方式；2. 檢測細胞增殖能力，細胞周期，蛋白表達；3. 將5-6周BALB/c 雄性裸鼠予以A375黑素瘤細胞株異種移植皮下成瘤並隨機分為5組，普萘洛爾及蘇尼替尼單獨或聯合處理後通過免疫組化檢測瘤體組織中Ki67的表達 ；4. 將A375細胞株及原代培養的肢端黑素瘤 P8細胞株經普萘洛爾聯合蘇尼替尼處理後提取總RNA，mRNA測序後進行深度分析，預測可能的靶基因並用 RT-PCR 對測序結果進行驗證。 重要結果：1. 與單用蘇尼替尼相比，在聯合藥物組中的蘇尼替尼IC50值分別降低了的53％和65％，提示普萘洛爾50μM聯合蘇尼替尼2.5μM時效果最佳，後續實驗也將沿用該最佳聯合治療方案；2. 普萘洛爾聯合蘇尼替尼處理A375細胞株後細胞集落形成率從78±3.8％降低至6±1.1％，處理P8細胞株無細胞集落形成；3. 聯合藥物處理後A375和P8細胞均出現G0/G1期細胞分布增加，S期細胞分布減少；4. 聯合藥物處理後抑制了A375黑素瘤細胞均一化後的p-ERK及p-Rb 磷酸化水平，下調了Cyclin D1及Cyclin E的表達，也抑制了P8原代黑素瘤細胞均一化後的p-Rb磷酸化水平，下調了Cyclin D1的表達；5. 普萘洛爾聯合低濃度蘇尼替尼組Ki67陽性細胞率低於單用低濃度蘇尼替尼組（51% ± 2.74% vs. 69.23% ± 8.16%）；6. 綜合分析兩株細胞共同差異基因發現IL24基因變化最為顯著，但siRNA干擾沉默IL24基因表達對藥物抑制細胞活力無顯著作用。 科學意義：蘇尼替尼在細胞水平及動物模型中可抑制惡性黑素瘤的細胞增殖；低劑量普萘洛爾可通過MEK/Cyclinh D1/Rb/Cyclin E通路介導引起G0/G1/S期細胞周期停滯增敏蘇尼替尼抑制惡性黑素瘤細胞增殖的能力，而未誘導細胞凋亡。
