《CAG調控的新型人畜共用布魯菌DNA 疫苗的構建及其初步套用》是依託中國人民解放軍第四軍醫大學，由張蕾擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：CAG調控的新型人畜共用布魯菌DNA 疫苗的構建及其初步套用
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：張蕾
- 依託單位：中國人民解放軍第四軍醫大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
布魯菌是人獸共患布魯菌病的病原菌，是一種胞內寄生菌，主要導致人波浪熱和結締組織疾病以及病畜流產。其致病性強，流行範圍廣，危害十分嚴重。本項目利用基因重組技術，將布魯菌rplL分別與omp31、bcsp31基因（分別編碼L7/L12，Omp31，Bcsp31蛋白）嵌合後分別克隆入真核表達載體pSCW中，利用CAG啟動子和調節元件WPRE進行轉錄調控結構的最佳化，同時聯合套用抗原加工分子基因（HSP70C、泛素），以在原有基礎上進一步提高嵌合基因的表達水平並促進抗原的加工和遞呈。另外，使用IL-12作為免疫佐劑，加強免疫效果。進一步對這些重組真核表達載體的免疫學特性進行系統比較研究，以期獲得更好的疫苗免疫保護效果。從而研製出較現有減毒活疫苗更為安全、簡便、有效的新型疫苗。本項目的實施和完成將為布魯菌DNA疫苗的研究提供重要的理論和實踐基礎，對於預防人畜布魯菌病均具有重要的意義。
結題摘要
布魯菌病是一種世界範圍的人畜共患病，可在人類，羊、牛、狗、豬等哺乳類動物以及沙林鼠等嚙齒類中廣泛傳播。該病可導致牲畜流產和人波浪熱。預防布魯菌病的有效途徑是對易感動物和人群進行疫苗接種。現有的布魯菌疫苗分為滅活疫苗和減毒活疫苗存在一些問題：布魯菌是一種胞內寄生菌，細胞免疫可清除細胞內布魯菌，在抗布魯菌感染免疫中占主導地位；而滅活疫苗引起的細胞免疫應答很低，保護力差；我國目前套用的減毒活疫苗包括羊M5、牛S19和豬S2，這些減毒活疫苗存在著毒力可能恢復而造成接種者感染的風險；另外，減毒活疫苗所產生的持續的血清學反應，導致無法區分人工免疫與自然感染。 本項目將布魯菌rplL與omp31/bcsp31基因（分別編碼L7/L12，Omp31，Bcsp31蛋白）克隆入雙表達框的穿梭載體pYr-ads-3中，利用CAG啟動子最佳化同時聯合套用抗原加工分子基因HSP70C，以在原有基礎上進一步提高嵌合基因的表達水平並促進抗原的加工和遞呈。將上述載體體外重組，克隆入腺病毒表達載體中，分別從DNA、RNA和蛋白水平對製備的腺病毒進行檢測，結果表明構建正確。將上述腺病毒載體純化後免疫小鼠，對其進行免疫學評價。結果所製備的腺病毒載體Ad-cag-rh-bcsp31h組和Ad-cag-rh-omp31h組抗體水平最高值均在末次免疫後9周出現，抗體滴度分別為1:5120和1:10240，均高於陽性對照M5組（p＜0.05）；ELISpot 檢測小鼠的脾細胞經特異性抗原刺激後能產生IFN-γ和IL-2的能力，結果表明各重組腺病毒組均大於M5疫苗組產生IFN-γ或IL-2的細胞數目（p＜0.05）；流式細胞術檢測免疫小鼠血液中CD4分子和CD8分子的含量，結果顯示，腺病毒組CD8分子高於空載體組，也高於M5組；各重組腺病毒組CTL效應隨著效靶比值的升高而增強，在效靶比100 : 1的時，殺傷效果最顯著。各重組腺病毒組和M5組的殺傷效應均強於鹽水組（p＜0.001）。其效靶比在100 : 1和50 : 1時，重組腺病毒組誘導的殺傷效應均高於M5疫苗對照組（p＜0.05），以Ad-cag-rh-omp31h組最佳。 在本項目的資助下我們已經發表SCI一篇，中文核心期刊兩篇，申請專利一項，畢業研究生一名。本項目的完成為布魯菌新型疫苗的研究提供重要的理論和實踐基礎，對於預防布魯菌病具有重要的意義。
