《B肝病毒重要靶標La蛋白的新型抑制劑HBSC11作用機制研究》是依託上海交通大學，由湯靜擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：B肝病毒重要靶標La蛋白的新型抑制劑HBSC11作用機制研究
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：湯靜
- 依託單位：上海交通大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
人La蛋白通過空間互補與B肝病毒RNA結合，保護其免受核酶降解，是B肝病毒在肝臟複製的重要基礎。我們發現套用La特異性siRNA可降低病毒穩定性，下調B肝病毒複製與蛋白質表達，表明La可能是研製抗B肝病毒新藥的重要靶標。課題組根據La晶體結構特點，套用Glide5.5分子對接軟體虛擬篩選，找到與La結合的吡啶並吡唑類化合物HBSC11，它能有效抑制細胞中B肝病毒DNA複製和病毒核心抗原表達，但確切機制尚未闡明。本項目擬在體外無細胞轉錄與翻譯體系、穩定表達B肝病毒的HepG2.2.15細胞株和B肝病毒轉基因小鼠三個水平進一步探索新化合物的作用機制，即觀察HBSC11與La蛋白的結合力及結合前後對B肝病毒體外無細胞轉錄與翻譯體系的影響，HBSC11在細胞水平和轉基因鼠體內對B肝病毒mRNA穩定性、病毒複製及蛋白質表達的作用，以及對La蛋白量效性和時效性的影響，為研製抗B肝病毒新藥提供理論依據。
結題摘要
人La蛋白通過空間互補與B肝病毒（HBV）RNA結合，保護其免受核酶降解，是肝臟複製的重要“保護傘”。前期研究發現La蛋白基因突變和表達沉默可以抑制HBV複製與蛋白表達，但確切機制尚未闡明。本項目通過人肝臟組織晶片檢測及體外細胞實驗發現，La蛋白S366位去磷酸化抑制HepG2.2.15細胞內HBV複製與表達，由此可以解釋La蛋白是HBV生命周期中的一個重要靶點；進而，套用Glide5.5 分子對接軟體虛擬篩選，找到與La 結合的吡啶並吡唑類化合物HBSC11，實驗顯示HBSC11具有靶向La蛋白的作用，並且能夠顯著抑制HepG2.2.15細胞內La蛋白的表達量，下調B肝病毒的複製水平和抗原表達水平；在採用流體動力學方法尾靜脈高壓注射質粒PAAV HBV1.2構建B肝病毒感染小鼠模型，在動物模型中，HBSC11顯示出與拉米夫定類似的抑制病毒複製作用，並且對肝細胞凋亡無顯著影響，尚需進一步增加動物數量以重複實驗數據，確證HBSC11的抗B肝病毒體內效應。本項目基本按照原計畫執行，研究結果在國內外著名期刊發表論文若干篇，其中在SCI 收錄期刊發表論著3篇，包括肝臟病毒學領域影響因子排名前列的雜誌《J Viral Hepat》(IF 4.088)2 篇以及生物學領域影響力較大的《PLoS ONE》(IF 4.092)1 篇，被國際上著名期刊如《CANCER METAST REV》(IF 10.573)等引用：認為該研究發現的小分子化合物HBSC11可以減少La 蛋白水平從而抑制B肝病毒複製與蛋白表達，是一種極具研究前景的抗B肝病毒治療方法。研究成果多次獲得中華醫學會臨床藥學分會、中國藥學會與中國藥理學會年會一等獎、2012年上海藥學科技三等獎和2012年上海醫學科技三等獎，項目申請人也因此獲得全國優秀青年藥理學工作者、上海市衛生系統優秀青年人才、上海交通大學醫學院九龍醫學優秀青年人才、上海交通大學附屬第一人民醫院醫學優秀青年人才等榮譽。
