《B型肝炎人源化小鼠模型的研製及動物實驗的研究》是依託浙江大學，由劉偉俠擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：B型肝炎人源化小鼠模型的研製及動物實驗的研究
- 依託單位：浙江大學
- 項目負責人：劉偉俠
- 項目類別：青年科學基金項目
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
因缺乏合適的動物模型，HBV感染及其引起的免疫反應和肝臟炎症研究受到限制。最近研究顯示，將人肝祖細胞和造血幹細胞共移植入AFC8轉基因的BALB/c-Rag-/-Il2rg-/-而製備的人源化小鼠支持HCV感染，並產生HCV特異性的T細胞反應。但是，人的細胞在該小鼠體內的植入和分化水平較低。已有研究表明，NSG小鼠對人細胞植入具有較高的支持率。為此，本項目擬通過（1）製備表達AFC8的轉基因小鼠AFC8/NSG、最佳化該轉基因小鼠肝細胞凋亡條件，提高人的造血幹細胞和肝細胞在該小鼠體內的植入水平；（2）將細胞因子孵育的造血幹細胞和攜帶miR-122模擬物的肝祖細胞移植入轉基因小鼠，提高人的造血幹細胞和肝細胞在轉基因小鼠體內的分化水平；（3）對人源化小鼠接種HBV，藉助分子生物學、免疫學方法研究HBV感染引起的人源化小鼠免疫反應及肝臟炎症，為人感染HBV所致的免疫反應和肝臟炎症提供動物實驗條件。
結題摘要
項目原計畫通過研製一種人源化小鼠模型來研究B肝病毒感染及其引起的免疫反應和肝臟炎症問題，但因執行難度太大而受阻。因此，項目現嘗試藉助其它模型繼續研究上述問題。眾所周知，B肝病毒感染具有噬肝性特點。而研究顯示，小鼠白蛋白基因啟動子/增強子與腺病毒顆粒都能調節基因在肝細胞內特異性表達，利用1.3拷貝HBV基因組製備的轉基因小鼠支持完整的病毒顆粒複製。因而， 我們將1.3拷貝HBV基因組分別插入到真核表達載體的小鼠白蛋白基因啟動子/增強子下游和腺病毒載體上構建重組質粒，為製備肝臟特異性表達HBV的轉基因小鼠提供材料。體外轉染表達的結果表明小鼠白蛋白基因啟動子/增強子提高了HBV胞膜蛋白的表達水平，且顯著提高了分泌到細胞外的HBsAg水平。這些結果為該載體的體內表達提供了重要的參考數據。目前臨床上的慢B肝患者一般是由B肝病毒攜帶者轉變而來，患者肝臟受到免疫損傷。HBV轉基因小鼠是日前研究HBV耐受的常用動物模型。已有實驗結果顯示，一定的免疫刺激能夠打破HBV轉基因小鼠的HBV免疫耐受狀態，觸發HBV特異的免疫反應。因此，為促進慢性B型肝炎的發病機制與治療策略研究，我們利用CD40的激動型抗體（佐劑）、TLR7 激動劑（佐劑）和HBsAg adw2的天然突變體表位肽S208聯合腹腔免疫HBV轉基因小鼠，12天時在小鼠脾臟內檢測到了少量的抗原特異性CD44+IFN-gamma+細胞，該結果為HBV免疫耐受的打破、以及由此引起的免疫反應帶來了的肝臟炎症研究帶來了希望。
