Foxp3-雙螢光報告系統人源化小鼠模型的構建

《Foxp3-雙螢光報告系統人源化小鼠模型的構建》是依託吉林大學，由梁婷婷擔任項目負責人的青年科學基金項目。

基本介紹

• 中文名：Foxp3-雙螢光報告系統人源化小鼠模型的構建
• 項目類別：青年科學基金項目
• 項目負責人：梁婷婷
• 依託單位：吉林大學

項目摘要

調節性T細胞(Regulatory T cells, Treg)在建立和維持免疫耐受過程中發揮重要作用。它與腫瘤的發生、發展關係密切，但具體機制和意義尚無統一的結論。目前尚缺乏一個理想的小動物模型- - 既含有人免疫系統又同時能追蹤人Treg，以用於上述內容的活體研究。本項目組在前期預實驗中採用慢病毒感染造血幹細胞的方法，構建了含有Foxp3調控序列和螢光標記的人源化小鼠模型，且在外周血中檢測到低比例的螢光陽性細胞，提示上述技術體系用於建立Treg細胞研究模型具有潛在可行性。本研究擬在前期研究基礎上，最佳化並構建含有Foxp3調控序列和雙螢光報告系統的慢病毒載體，建立具有健全人免疫系統功能和示蹤作用的人源化小鼠模型，用於Treg的研究，為闡明Treg在腫瘤發生、發展中的作用和意義提供動物平台，為基於此模型的抗腫瘤藥物的研發提供新思路。

結題摘要

調節性T細胞（Regulatory T cells, Treg）在建立和維持免疫耐受過程中發揮重要作用。它與腫瘤的發生、發展關係密切，但具體機制和意義尚無統一的結論。目前尚缺乏一個理想的小動物模型——既含有人免疫系統又同時能追蹤人Treg，以用於上述內容的活體研究。 Forkhead box P3 （Foxp3），在Treg的分化發育調控和免疫抑制功能發揮中具有重要作用。Foxp3的持續穩定表達對於維持Treg的免疫抑制功能必不可少，目前研究表明Foxp3是Treg細胞重要的代表性分子。本研究擬通過構建以Foxp3為基礎的載體來構建人源化小鼠模型，監測Treg細胞的發育和功能。 在前期研究中課題組採用慢病毒感染造血幹細胞的方法，構建了含有Foxp3調控序列和螢光標記的人源化小鼠模型，且在外周血中檢測到低比例的螢光陽性細胞，提示上述方法和思路具有可行性。本項目開展後，首先對慢病毒載體的Foxp3啟動子元件進行了篩選，構建了相應的慢病毒載體（含有Foxp3調控元件和GFP），該載體感染Jurkat細胞後經TCR信號刺激後GFP陽性細胞數明顯增加，進一步篩選GFP表達效果最佳的慢病毒載體進行了人源化小鼠的構建，可檢測到較少數量的GFP陽性CD4+CD25+T細胞(包含有人Treg細胞)，尚不足以進行後續功能分析。而後續雙螢光報告載體的構建過程中存在技術難題，未能解決，拖延了實驗進度。 經過三年的探索，利用上述方法在體外人腫瘤細胞和免疫細胞實驗中取得了部分陽性結果，對該研究方法是一種肯定。對導致研究未能順利完成的主要因素進行了詳細的分析和總結，主要包括慢病毒載體骨架大小的選擇對於病毒包裝效率和滴度具有重要影響；Treg細胞表面標誌複雜多樣，如何區分Treg與其他T細胞，且對T細胞本身影響最小，需要在後續研究中進行闡明；除外周血中存在天然Treg細胞外，誘導型Treg細胞通常可長時間停留在其他免疫組織或器官，如淋巴結中，多部位取材更有利於Treg細胞的分離和檢測，獲得實驗的陽性結果。以上內容值得我們繼續探索和研究。