《2-DE和MALDI 成像技術研究多氮化合物對HIF特定信號通路的調控》是依託南京大學，由王志林擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：2-DE和MALDI 成像技術研究多氮化合物對HIF特定信號通路的調控
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：王志林
- 依託單位：南京大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
本項目圍繞2-DE和MALDI 成像技術研究多氮化合物對HIF特定信號通路的調控進行如下研究：（1）設計和合成一系列新型多氮類化合物，運用1H NMR、ESI-MS、FTIR等方法對化合物進行表征。（2） 結合ITC、LC-MS/MS和螢光等技術研究多氮化合物對脯氨酸羥化酶的抑制作用，篩選出具有抑制脯氨酸羥化酶活性和可調控HIF功能的小分子。（3）研究先導分子在腫瘤細胞中對HIF調控的特定信號轉導通路（HIF-VEGF）的影響，獲得對HIF有特異性調控作用的化學小分子探針，作為治療心血管疾病的潛小分子藥物。（4）建立實驗動物模型，結合病理切片和MALDI成像技術進行小分子抑制劑處理前、後組織切片的病理變化和成像分析，從而評價小分子抑制劑在動物模型上的套用。通過深入研究多氮化合物與脯氨酸羥化酶的相互作用及其對HIF特定信號轉導通路的調控為治療缺氧性疾病提供有益信息。
結題摘要
本項目圍繞2-DE和MALDI 成像技術研究多氮化合物對HIF特定信號通路的調控進行了系統研究，取得了以下有新意的研究成果：(1) 設計合成了8個唑類小分子，利用光譜（螢光光譜和圓二色光譜）和MALDI質譜探討了唑類小分子與PHD3蛋白的相互作用，並通過計算模擬的方法得到小分子與蛋白的結合模式、推測了它們抑制酶活性的機理；進一步運用RT-PCR和Western-Blot研究了唑類小分子對特定信號轉導通路HIF-GLUT/VEGF的調控。（2）設計合成了兩個多氮錳配合物（13和14），研究了分子13和14對細胞內ROS水平進行調控，並運用RT-PCR、WB和SiRNA等方法探究了分子13和14對HIF相關信號通路（HIF-VEGF/EPO/HO-1）的調節作用以及對分化的大鼠嗜鉻細胞瘤細胞（PC12）和原代神經元細胞應對氧化損傷的保護作用。（3）設計合成了兩個脯氨酸底物類似物PA1和PA2，研究了PA1和PA2對脯氨酸羥化酶活性的影響；進一步運用RT-PCR和Western-blot等方法研究了化合物PA1對HIF-VEGF信號轉導通路的調控，同時，運用2-DE和MALDI-TOF/TOF-MS鑑定得到了PA1引起的NCI-H446細胞內9個顯著差異表達的蛋白，其中丙酮酸激酶M1/M2（PKM）和α烯醇酶（ENO1）是細胞糖酵解的關鍵調控因子，且活性直接受HIF-1α調控。 (4)運用MTT法研究了Zn2+-四氮環配合物（L-Zn）對癌細胞株，正常細胞株和順鉑耐藥細胞株的細胞增殖影響，並運用RT-PCR和Western-blot研究了L-Zn對HIF-1α及其下游靶基因（GLUT1和VEGF）表達的影響，進一步利用皮下種植H22肝癌的ICR小鼠模型評估了L-Zn的體內抗腫瘤活性，L-Zn的抗腫瘤活性存在劑量依賴效應，表現出良好的抗腫瘤活性；進一步運用RT-PCR、WB及流式細胞技術等方法研究了L-Zn對HepG2細胞凋亡的影響作用及其機制，並通過2-DE結合質譜技術研究了L-Zn誘導HepG2細胞全蛋白的變化，發現了18個表達有差異的蛋白質點，主要是細胞新陳代謝，調節基因表達和細胞凋亡相關的蛋白。
