鬼筆環肽

鬼筆環肽（phalloidin），是從一種劇毒磨菇(Amanita phalloides)中分離出來的一種多肽物質，屬於毒傘肽類毒素，是一種強烈毒素。C35H48N8O11S。無色，細針狀結晶。分子量788.87g/mol， 熔點281oC.

基本介紹

• 中文名：鬼筆環肽
• 外文名：phalloidin
• 性質：劇毒生物鹼
• 特點：無色，細針狀結晶

物質介紹

與鵝膏毒鹼（amanitin）一起存在，毒性比鵝膏毒鹼弱，對小鼠的致死劑量是50微克，對人體也有很強的毒性，可引起流涎、嘔吐、便血、發紺、痙攣、肌肉攣縮，以致死亡。它同細胞鬆弛素B的作用相反, 只與聚合的微絲結合, 而不與肌動蛋白單體分子結合。它同聚合的微絲結合後, 抑制了微絲的解體, 因而破壞了微絲的聚合和解聚的動態平衡。通過讓這種毒素連線於螢光染料上面，研究人員可以研究細胞的內部工作機制，窺視細胞如何分裂。通過這些觀察，他們可以揭開癌症工作機制和組織生長之謎。

美國加州大學聖克魯斯分校的兩位化學家斯科特·洛基和勞拉·舒利斯科(Laura Schuresko)利用一種稱為固相合成(solid-phase synthesis)的手法，製造出了鬼筆環肽的類似物質谷氨酸7-鬼筆環肽（Glu7-Phalloidin)。另一位科學家（Anderson MO)合成出了鬼筆環肽的另一類似物質丙氨酸7-鬼筆環肽（Ala7-Phalloidin)。

美國多肽公司（American Peptide Company, USA)的研究人員劉寶生（Baosheng Liu）和張建恆（Jianheng zhang)利用固相合成和液相合成相結合的方法成功合成出了鬼筆環肽。用化學法合成的鬼筆環肽其物理和化學性質與從毒蘑菇中提取的天然鬼筆環肽一致。

FITC和Rhodamin等螢光物質標記的鬼筆環肽可特異的與真核細胞的F-actin結合，從而顯示微絲骨架在細胞中的分布。

配製

0.1mg鬼筆環肽溶於1ml無水甲醇（也可用DMSO或無水乙醇溶解）配成貯存液，可在-20度避光的條件下長期保存，工作液的濃度為5ug/ml，由貯存液加生理鹽水PBS稀釋20倍即可。

染色程式

生理鹽水PBS清洗細胞2次，每次10分鐘；

3.7%-4%的甲醛或多聚甲醛固定20分鐘，生理鹽水PBS清洗細胞2次；

加入5ug/ml的FITC-鬼筆環肽室溫染色30-60分鐘，夏季時間可以短一些，生理鹽水PBS清洗細胞2次；

DAPI或hoechst33258染細胞核10分鐘，生理鹽水PBS清洗細胞2次；

吸去多餘水分，加螢光封片液（中性或偏鹼性緩衝液加等量甘油），蓋上蓋玻片，螢光或共聚焦顯微鏡下觀察。

注意事項

鬼筆環肽的分子量小，很容易通過細胞，不需要對細胞進行冷丙酮和TRITON X-100處理。

藥品價格昂貴，0.1mg的售價接近兩千元，要節約使用。

毒性較大，戴上手套操作。