預凍法

食品在冷凍乾燥之前，首先在快速凍結裝置中或凍結間進行快速凍結。由於冷凍乾燥工藝要求食品呈顆粒狀，所以採用流態化單體快速凍結方法最為適宜。速凍後的食品貯藏在一18。C的冷藏庫中，隨時取用進行冷凍乾燥。

基本介紹

• 中文名：預凍法

植物細胞超低溫保存的主要方法

植物細胞的超低溫保存技術主要包括乾凍法、預凍法、兩步法、玻璃化法和包埋脫水法等。兩步法、預凍法和乾凍法是植物種質超低溫保存的傳統技術。80年代末至90年代初，玻璃化法和包埋脫水法開始套用於植物材料的超低溫保存。

乾凍法：

進行脫利用無菌空氣流，乾燥矽膠或飽和溶液表面的氣相等對樣品水處理，然後快速將樣品投入液氮貯存

預凍法：

樣品在添加冰凍保護劑(如蔗糖、海藻糖、二甲亞碸、甘油和乙二醇等)後置於零下某個溫度(一10～一70C，可通過置於家用冰櫃、低溫冰櫃或液氮蒸汽相中實現)，若干小時或過夜後，將樣品投入液氮貯存。有些樣品用預凍法保存時，可不加冰凍保護劑。

兩步法：

樣品在添加冰凍保護劑後，用可控速率的降溫設備(程式降溫儀)，以某個速率(每分鐘降0．1～5．0。C)將樣品降溫至轉移溫度(一般為一40～一70‘C)，然後投入液氮貯存。冰凍保護劑成分、降溫速率和轉移溫度等因素影響凍存效果。預凍法實際上是降溫速率不嚴格控制的兩步法。

玻璃化法：

樣品用高濃度的複合冰凍保護劑(玻璃化保護劑)處理後．快速投入液氮貯存。生物物理學上，含水溶液能固化分成兩種主要形式，一種是冰晶態，一種是玻璃化態。如果溶液非常粘稠，降溫速度又非常快，冰晶難以生長或沒有充分時間生長，溶液就進入玻璃化態。進入玻璃化態時，水分子沒有發生重排，不產生結構和體積的變化，減輕了機械損傷和溶液效應損傷，改善了凍存效果。兩步法中的第一步是通過細胞外緩慢結冰引起胞外溶液濃縮，從而誘導胞內脫水；第二步是濃縮了的細胞質在快速投入液氮時進入胞內玻璃化態。而在玻璃化法超低溫保存中，細胞直接用極高濃度的保護劑脫水，快速降溫時胞內胞外都進入玻璃化態。

包埋脫水法：

莖尖、分生組織和體細胞胚等樣品用褐藻酸鈣包埋後，第一階段先在含高濃度蔗糖的培養基中脫水，第二階段再用無菌空氣流或乾燥矽膠脫水，然後投入液氮貯存。如果第二階段用玻璃化保護劑脫水後投入液氮貯存，可稱包埋玻璃化法；如果第二階段在冰櫃中脫水，可稱包埋預凍法；如果第二階段用程式降溫儀脫水，可稱包埋兩步法。