《面向高通量篩查分析的微柱色譜新技術》是依託廈門大學，由張博擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：面向高通量篩查分析的微柱色譜新技術
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：張博
- 依託單位：廈門大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
以發現差異表達蛋白群為目標的蛋白質組學篩查分析需要高通量的分離分析方法。本研究擬建立高質量納流色譜微柱的大規模、高通量、低成本製備技術，發展集高效富集-分離為一體的多功能柱型。在此基礎之上，構建基於並行多道納流液相色譜的高通量篩查分析系統，並聯合液滴微流控技術實現超微量組分的大規模製備和目標組分提取。以臨床樣本（人尿液/血液）為對象，考察高通量篩查-目標蛋白群深度解析這一分析策略的有效性，進而為臨床蛋白質組學研究提供有用的生物學信息。
結題摘要
本研究建立了高質量納流色譜微柱的大規模、高通量、低成本製備技術，發展了微尺度高效富集與分離方法。在此基礎之上，構建基於並行多道納流液相色譜的高通量篩查分析系統，並聯合液滴微流控技術實現超微量組分的大規模製備和目標組分提取。以臨床樣本為對象，初步考察了高通量篩查-目標蛋白群深度解析這一分析策略的有效性。所取得重要研究進展如下： 1，基於單顆粒柱塞技術建立了高質量納流液相色譜柱的製備技術。所獲得微柱具有高柱效、高峰容量、適用多種固定相的優勢。考察了反相、親水以及殼-核固定相的納流液相色譜行為，並製備了1米長柱，獲得了常壓條件下反相色譜（800）和親水色譜（130）的極限峰容量。為微納尺度蛋白質組學樣品的高分辨分離分析給出了極限參考指標以及有效的分離工具。 2，建立了色譜微柱的大規模、高通量、低成本製備技術。基於離心力，實現50支色譜微柱的同步製備，達到500支/天的製備通量。所獲得的柱子具有高柱效和高柱間重現性的優良屬性，滿足了同步多柱分離對微柱製備通量的需求。 3，構建了面向高通量篩查分析的並行多道分離系統，光學檢測系統和點板系統，實現了高達96通道的納流液相色譜分離。分別實現了8通道紫外和96通道雷射誘導螢光檢測，並對分離後的樣品進行點板儲存。 4，採用16份人尿蛋白樣本進行了篩查分析，直觀比對尿蛋白高分辨圖譜。並對感興趣的樣品點分別進行了ESI-MS和MALDI-MS檢測，充分證明了對目標樣品點進行“精讀”的優勢及其對複雜蛋白分子解析的必要性。 經過四年的研究，已全部完成計畫內容，且所建立的高通量微柱製備技術和陣列式並行多通道液相分離平台為今後研究進一步拓展和實際套用打下了良好的基礎。該研究項目截至目前已發表論文9篇（原計畫發表8篇文章），另有4篇在修稿中；申請發明專利7項（原計畫申請2項專利），其中4項已獲授權；國際/全國會議口頭報告6個，海報39篇。已畢業博士1名、碩士4名；正在培養博士生3名，碩士生3名。
