電離輻射誘發間充質幹細胞基因組非穩定性的研究

《電離輻射誘發間充質幹細胞基因組非穩定性的研究》是依託吉林大學，由白鷗擔任項目負責人的面上項目。

基本介紹

• 中文名：電離輻射誘發間充質幹細胞基因組非穩定性的研究
• 項目類別：面上項目
• 項目負責人：白鷗
• 依託單位：吉林大學

項目摘要

電離輻射引起的延遲基因突變、染色體畸變與腫瘤發生密切相關。這種遲發效應是電離輻射誘導基因組DNA非穩定性改變累積的結果，但其發生的原因與機制仍不清楚。建立既能穩定傳遞遺傳信息，又能觀察多次刺激累積效應的檢測系統，是闡明電離輻射等致癌因素誘導的基因組非穩定改變，與延遲基因突變、染色體畸變、細胞惡變關係的關鍵。本研究依據幹細胞非對稱性分裂特性，針對與惡變轉化率關係密切的微衛星非穩定和區域性染色體非穩定為目標基因。設計並套用GFP標記目的基因組非穩定性報告系統，體外組裝轉入大鼠骨髓間充質幹細胞。套用電離輻射等致癌因素誘導基因組非穩定性，特異性報告系統篩選攜帶基因組非穩定性改變的間充質幹細胞克隆。定性、定量分析靶細胞目標基因組非穩定性變化規律，明確電離輻射等致癌因素多次累積刺激，誘發間充質幹細胞基因組非穩定，與延遲基因突變、染色體畸變、細胞惡性轉化率之間的關係。

結題摘要

腫瘤發生與基因損傷密切相關,環境中存在多種致癌因素可造成基因的累積性損傷，其中電離輻射及化學藥物引起的非DNA靶效應已成為國內外學者研究熱點。本課題依據間充質幹細胞易分離、純化、擴增、體外培養轉染和低免疫原性等特徵，設計並完成了套用大鼠間充質幹細胞檢測基因組非穩定性改變的實驗研究。第一，構建了基因組非穩定性報告系統質粒，共4個。包括微衛星非穩定性和區域染色體基因組非穩定性報告系統質粒。第二，進行前期實驗，以黑色素瘤B16細胞為載體導入基因組非穩定性報告系統，套用60Coγ射線誘導基因組非穩定性表達。第三，套用電轉染方法成功轉染大鼠骨髓的間充質幹細胞。第四，通過梯度濃度培養法篩選建立穩定表達微衛星及區域染色體基因組非穩定性報告系統的間充質幹細胞系。第五，套用該細胞系檢測化學藥物紫杉醇以及60Coγ射線對間充質幹細胞的微衛星非穩定性和區域染色體非穩定性的作用，證明化療藥物、放射性因素等對幹細胞基因組非穩定的影響，確定了紫杉醇誘導微衛星非穩定性及區域染色體非穩定性表達的最佳劑量及時間。第六，通過尾靜脈注射法，將穩定表達微衛星基因組非穩定性報告系統的間充質幹細胞注射給大鼠，給予紫杉醇、60Coγ射線等處理，進一步完成微衛星和區域性染色體基因組非穩定性的動物體內試驗。