雙向擴散法又稱瓊脂擴散法，是利用瓊脂凝膠為介質的一種沉澱反應，通過擴散作用使分處兩處的抗原和相應抗體相遇，形成抗原—抗體複合物，比例合適時將出現沉澱現象。
基本介紹
- 中文名：雙向擴散法
- 又稱：瓊脂擴散法
- 性質：一種沉澱反應
- 介質：利用瓊脂凝膠為介質
方法
(一)試管法
先在試管中加入含有抗體的瓊脂，凝固後在中間加一層普通瓊脂，冷卻後再將抗原溶液加到上層，放置後，下層的抗體和上層的抗原向中間瓊脂層內自由擴散，在抗原抗體濃度比例恰當處形成沉澱線。此方法做起來麻煩，並且只能測定一個標本，所以臨床檢驗中很少用。
(二)平板法
是鑑定抗原抗體的最基本、最常見的方法之一。該方法的基本步驟是：先在乎板玻璃上傾注一均勻的瓊脂薄層，凝固後在瓊脂板上打孔，孔徑一般為3mm，孔間距通常在3～5mm，孔的排列可呈梅花形、雙排形或三角形等。在相對的孔中加入抗原或抗體，放置濕盒37~C18—24h後，瓊脂中各自擴散的抗原和相對應的抗體可在濃度比例適當處形成可見的沉澱線。根據沉澱線的有無、形態和位置可作如下分析：
1．抗原或抗體的存在與否以及相對含量的估計沉澱線的形成是根據抗原抗體兩者比例所致，沉澱線如果靠近抗原孔，則表示抗體含量較大；沉澱線如果靠近抗體孔，則表示抗原含量較大；不出現沉澱線則表明無對應的抗體或抗原或者抗原過量。
沉澱線形狀、位置與抗原抗體分子量及濃度的關係
2．抗原或抗體相對分子量的分析抗原或抗體在瓊脂內自由擴散，其速度受分子量的影響。分子量小者擴散快，反之則較慢。由於慢者擴散圈小，局部濃度則較大，形成的沉澱線彎向分子量大的一方；如果兩者分子量大致相等，則形成直線。
3．抗原性質的分析兩種受檢抗原的性質可完全相同、部分相同或完全不同。三種情況在雙向擴散試驗中表現如圖所示，A兩條沉澱線互相吻合相連，表明抗體與兩個抗原中的相同表位結合而沉澱，兩個抗原相同，C沉澱線呈部分相切，說明兩個抗原之間有部分相同；B兩條沉澱線交叉而過，說明兩個抗原完全不同。
雙向擴散試驗不同形態的沉澱線
4．抗體效價的滴定雙向擴散試驗是抗血清抗體效價滴定的常規方法。固定抗原的濃度，稀釋抗體；或者抗原和抗體雙方皆作不同的稀釋，經過自由擴散，形成沉澱線，以出現沉澱線最高的抗體稀釋度為該抗體的效價。
5．抗原或抗體純度鑑定用混合抗原或抗體鑑定抗體或抗原，出現一條沉澱線說明待測抗原或抗體純，出現多條沉澱線說明不純。
雙向擴散試驗簡單易行，用途廣泛，但該技術靈敏度低，出現結果慢，不能精確定量，這些弱點在相當程度上限制了它的套用。
抗體效價結果
