《長鏈非編碼RNA-PTCHD3P1調控胰腺癌侵襲和轉移的機制研究》是依託同濟大學，由艾開興擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：長鏈非編碼RNA-PTCHD3P1調控胰腺癌侵襲和轉移的機制研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：艾開興
- 依託單位：同濟大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
胰腺癌的早期侵襲與轉移的分子調控機制一直是該領域的難點與熱點。長鏈非編碼RNA（lncRNA）在胰腺癌等惡性腫瘤的侵襲、轉移過程中起著重要調控作用。我們的前期研究發現lncRNA -PTCHD3P1在胰腺癌組織尤其是轉移組織中表達顯著增高，提示其與胰腺癌細胞的遷移、侵襲密切相關。進一步的分析提示PTCHD3P1可作為競爭性內源RNA（ceRNA）調控let-7a。而let-7a-HMGA2-EMT網路在包括胰腺癌等腫瘤的侵襲與轉移中起著重要的作用。因此，我們推測PTCHD3P1可作為ceRNA調控let-7a並介導EMT，促進胰腺癌細胞的侵襲與轉移過程。本研究擬在前期研究基礎上，通過體內外實驗進一步探討在胰腺癌中PTCHD3P1、let-7a及其下游靶基因的表達變化規律，深入分析PTCHD3P1調控胰腺癌細胞侵襲與轉移的功能，闡明PTCHD3P1調控胰腺癌侵襲與轉移的分子機制。
結題摘要
本研究中我們利用生物信息學分析結合經典分子生物學技術等,在分子水平、細胞水平、實驗動物水平及臨床樣本中探索異常表達的長鏈非編碼RNA SVIL-AS1對胰腺癌生物學行為的影響及機制。研究組以60例胰腺癌患者的癌組織和癌旁組織為實驗樣本,採用qRT-PCR進行lncRNA SVIL-AS1表達驗證。結果發現,lncRNA SVIL-AS1在癌組織中呈現低表達狀態。結合患者的臨床病理信息發現，lncRNASVIL-AS1的表達水平與胰腺癌患者的腫瘤大小、TNM分期及淋巴結轉移呈明顯負相關關係，提示lncRNA SVIL-AS1可能參與胰腺癌細胞増殖和侵襲轉移有關。為探索lncRNA SVIL-AS1對細胞功能的影響,我們用慢病毒包裝的過表達載體研究lncRNA SVIL-AS1的過表達效果,並對panc-1和Bxpc-3過表達系進行一系列細胞功能實驗，觀察其對胰腺癌細胞增殖、凋亡、遷移、侵襲等能力的影響。我們發現過表達lncRNA SVIL-AS1後，胰腺癌細胞的增殖、凋亡、遷移、侵襲能力未有明顯變化。同時用裸鼠腫瘤異位種植實驗驗證lncRNA SVIL-AS1表達與腫瘤生長和轉移的相關性，發現lncRNA SVIL-AS1可明顯降低裸鼠體內腫瘤生長的速度，同時提高裸鼠的存活率。為了探明lncRNA SVIL-AS1造成這種現象的機制，我們對體外構建的PANC-1過表達系進行了二代測序，GSEA分析揭示SVIL-AS1過表達後發生重大變化的KEGG通路，注意到SVIL-AS1過表達後下降的途徑多與免疫調節有關。於是研究組猜想lncRNA SVIL-AS1參與調控了腫瘤與腫瘤微環境的某種信號交流，導致了體內腫瘤減小而體外培養時癌細胞無明顯變化。將過表達後下調的各個KEGG通路中的leading edge genes 取出，提取其中的差異表達基因，進行蛋白質相互作用網路分析，發現c-JUN、CCL2等處於網路的核心位置，提示他們可能是介導SVIL-AS1抗腫瘤作用的主要調控因子。CCL2的表達可以影響腫瘤免疫微環境中單核巨噬細胞的極化方向，於是研究組對THP-1（人單核細胞系）和胰腺細胞系進行共培養，發現lncRNA SVIL-AS1過表達時，可以使THP-1在分化時更多地由抑制腫瘤免疫的M2向促進腫瘤腫瘤免疫的M1極化，從而使腫瘤微環境更不利於胰腺癌的生長和轉移。
