《長鏈非編碼RNA n385229吸附miR-497對胰腺癌化療耐藥表型的調控作用》是依託山東大學，由徐建威擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：長鏈非編碼RNA n385229吸附miR-497對胰腺癌化療耐藥表型的調控作用
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：徐建威
- 依託單位：山東大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
胰腺癌化療耐藥機制是目前研究的熱點和難點。我們前期研究發現miR-497負向調控IGF-1R和FGFR1，參與胰腺癌化療敏感性調控，部分成果已發表至Oncotarget雜誌；生物信息學分析發現lncRNA-n385229序列上有多個miR-497種子區的結合位點，下調lncRNA-n385229，促進miR-497表達，降低IGF-1R和FGFR1的蛋白表達水平。因此，我們推測：lncRNA-n385229作為ceRNA，競爭性結合miR-497，進而調控miR-497靶基因（IGF-1R、FGFR1）的表達水平，從而參與胰腺癌化療耐藥表型的調控。本課題擬通過體內外實驗探索lncRNA-n385229/miR-497/（IGF-1R、FGFR1）對胰腺癌吉西他濱化療敏感性的調控作用及調控機制；並結合臨床標本，明確lncRNA-n385229/miR-497評估化療敏感性、及判斷預後的價值。
結題摘要
胰腺癌化療耐藥機制是目前研究的熱點和難點。項目計畫對lncRNA-n385229/miR-497/靶基因對胰腺癌化療敏感性的調控作用進行研究，但是在執行過程中，及時發現了原課題假說的局限性，並調整了研究內容。本課題主要通過體內外實驗探索了長鏈非編碼RNA UCA1調控胰腺癌化療耐藥的作用及機制。 首先，對胰腺癌組織（94例）及癌旁組織（73例）中UCA1表達水平進行了原位雜交檢測。胰腺癌組織UCA1表達水平與癌旁組織無統計學差異（p=0.734）。根據評分情況，將隨訪信息完整的88例胰腺癌患者分為低表達組（72例）和高表達組（16例）。臨床病理參數與組織UCA1表達水平並無顯著相關性，但多因素生存分析發現UCA1表達水平是獨立預後因素。 然後，體外實驗發現，下調UCA1顯著抑制胰腺癌細胞增殖，增加吉西他濱化療敏感性，抑制細胞遷移能力，下調胰腺癌幹細胞標誌物表達水平。上調UCA1，可觀察到相反的效應。構建穩轉細胞株，建立裸鼠皮下移植瘤模型，並進行吉西他濱化療干預。實驗發現，UCA1下調組與對照組相比：腫瘤體積無顯著差異，體重變化具有統計學差異，移植瘤CD44表達水平有統計學差異。 最後，對UCA1調控機制進行了探索。通過生物信息學預測，UCA1序列上存在miR-16結合位點。RNA免疫共沉澱實驗（RIP）證實，UCA1與miR-16存在結合作用。通過生物信息學資料庫對UCA1與靶基因的結合作用進行了分析，共預測16條靶基因。qRT-PCR檢測發現，上調及下調UCA1後，均出現統計學差異的基因包括：CXCL2，KLK6，KLK7，CEACAM1，GBP1，ICAM1，S100p；部分基因僅在上調或下調UCA1後出現表達異常，包括TRIM29，PHLPP1，LAMP3，KRT18。 我們的研究為胰腺癌耐藥機制的研究提供了新的思路；有望為逆轉胰腺癌化療耐藥，尋找新的分子治療靶點奠定基礎；該研究探索的分子，可能用於判斷胰腺癌患者化療敏感性及預後，指導個體化治療。
