《鋅指核酸酶定點突變轉基因山羊外源性GFP基因的研究》是依託揚州大學，由袁玉國擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：鋅指核酸酶定點突變轉基因山羊外源性GFP基因的研究
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：袁玉國
- 依託單位：揚州大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
本項目以F1代轉GFP基因山羊胎兒成纖維細胞為研究對象，基於人工鋅指核酸酶基因打靶理論，通過對轉染細胞中外源GFP基因靶向序列分析、突變事件發生和細胞表達綠色螢光的比例以及強度的變化，探討人工鋅指核酸酶介導山羊胎兒成纖維細胞中外源基因靶向修飾的可能性，並揭示靶向序列發生修飾的方式和效率，同時結合細胞稀釋法獲得GFP突變型單克隆細胞株；分別以GFP突變型細胞和正常細胞為供核細胞構建重構胚，比較二者在各期胚胎髮育率上的差異，並獲得GFP突變型轉基因克隆山羊，以探討人工鋅指核酸酶介導基因靶向修飾對克隆胚胎髮育的影響，同時建立以鋅指核酸酶技術為基礎的動物轉基因體細胞克隆技術平台。為鋅指核酸酶技術結合體細胞核移植技術生產轉基因克隆羊、轉基因動物標記基因敲除提供理論和技術支持。
結題摘要
基因組靶向修飾是近年來生命科學研究的熱點之一，特別是在基因功能分析、生產模式動物、治療人類疾病和優良家畜育種等方面，基因組靶向修飾具有廣闊的套用前景。本項目針對獲得無標記基因轉基因羊的目的和要求，在鋅指核酸酶基因打靶載體構建、載體打靶功能檢驗、打靶效率和突變方式和山羊體細胞核移植等技術環節上開展了研究相關研究工作，建立山羊GFP基因組打靶相關技術體系，打靶效率達到5%；最佳化了山羊轉基因克隆技術體系，獲得了2隻活的轉基因克隆羊。為鋅指核酸酶技術結合核移植技術生產轉基因克隆羊、轉基因動物標記基因敲除提供理論和技術支持。
