金黴素預混劑的製備方法:專利背景,發明內容,專利目的,技術方案,有益效果,權利要求

專利背景

金黴素預混劑屬四環類抗生素藥物飼料添加劑，主要活性成分為金黴素鈣鹽，其抗菌譜廣，對革蘭氏陽性菌、革蘭氏陰性菌、螺旋體、立克次體、支原體、衣原體等均有較強的抑制作用，不僅可以預防和治療禽畜疾病如細菌性肺炎、細菌性腸炎、鉤端螺旋體病、豬鏈球菌性頰部膿腫、雞傳染性滑膜炎等，而且可以促進禽畜對營養物質的吸收，提高飼料轉化率，促進禽畜生長。此外，金黴素預混劑還具有生產工藝較成熟，效價較高，使用成本相對較低；人畜不交叉使用，避免了交叉耐藥；使用安全性高，低劑量長期使用不會引起藥物殘留；與其它獸藥之間少有配伍禁忌，可用作基礎藥物與其它獸藥製成複合藥物飼料添加劑等優點。

截至2012年10月，隨著畜牧業的進一步發展，金黴素預混劑的市場需求量不斷擴大，預計在未來較長一段時間內也是藥物飼料添加劑的主力產品之一，而中國國外客戶對金黴素預混劑的質量要求越來越高（如金黴素含量大於23%），且產品價格與活性成分含量直接相關，因此，有必要改進和完善金黴素預混劑的製備方法。

發明內容

專利目的

《金黴素預混劑的製備方法》的目的在於提供一種改進的製備金黴素預混劑的方法，提高發酵單位和提取收率，提高產品質量和活性成分含量，同時生產工藝簡單、快速、穩定。

技術方案

《金黴素預混劑的製備方法》包括以下步驟：

a．種子培養：將金色鏈黴菌（Streptomyces aureofaciens）斜面孢子懸浮液接種入種子罐，用種子培養基在溫度30-33℃、通氣量1:1.5-2.0v/v/分鐘、罐壓0.03-0.05兆帕、攪拌速度150-230轉/分鐘的條件下培養20-26小時；

所述種子培養基按質量百分濃度計由以下組分組成：澱粉酶0-0.05%、硫酸銨0.2-0.6%、碳酸鈣0.2-0.6%、氯化鈣0-0.3%、玉米蛋白0-1%、玉米澱粉3-5%、玉米漿0-0.8%、葡萄糖0-0.6%、硫酸鎂0.02-0.04%、花生餅粉0-4%、磷酸二氫鉀0.01-0.06%、氯化鈉0-0.3%、黃豆餅粉0-4%、植物油或豆油0-0.6%、酵母粉0-2%、餘量為水；

b．發酵培養：將步驟a製得的種子培養液接入發酵罐，用發酵培養基在溫度28-33℃、通氣量1:0.8-1.0v/v/分鐘、罐壓0.02-0.05兆帕、攪拌速度120-180轉/分鐘的條件下發酵培養80-160小時，在發酵培養過程中通過添加氨水確保發酵液pH在5.6-6.2之間，並根據發酵液的總糖濃度和總糖濃度控制指標添加補料培養基；

所述總糖濃度控制指標為：發酵培養0-40小時控制總糖質量百分濃度不低於4.0%，發酵培養40-80小時控制總糖質量百分濃度低於4.0%但高於2.5%，發酵培養80小時後控制總糖質量百分濃度不高於2.5%；

所述發酵培養基按質量百分濃度計由以下組分組成：澱粉酶0.002-0.02%、硫酸銨0.5-1%、消泡劑0-0.06%、碳酸鈣0.4-0.7%、氯化鈣0-1%、玉米蛋白0-1%、玉米澱粉0-8%、玉米漿0-2%、葡萄糖0-1%、硫酸鎂0.001-0.3%、花生餅粉0-4%、磷酸二氫鉀0.01-0.03%、氯化鈉0.1-0.4%、黃豆餅粉0-5%、植物油或豆油0-0.3%、酵母粉0-2%、餘量為水；

所述補料培養基按質量百分濃度計由以下組分組成：澱粉酶0-0.08%、硫酸銨0-0.7%、消泡劑0.02-0.08%、碳酸鈣0.2-0.6%、氯化鈣0-1.0%、玉米蛋白0-1.0%、玉米澱粉0-50%、玉米漿0-2.6%、葡萄糖0-0.6%、硫酸鎂0-0.03%、花生餅粉0-1%、磷酸二氫鉀0-0.02%、氯化鈉0.2-0.5%、黃豆餅粉0-1%、植物油或豆油0-0.6%、酵母粉0-0.5%、餘量為水；

c．提取：取步驟b製得的發酵液，加入相當於發酵液體積0-12%的碳酸鈣，攪拌20-40分鐘，板框壓濾，壓濾完畢後，將板框濾餅在進風溫度210-260℃、排風溫度90-120℃條件下進行旋轉閃蒸乾燥，乾燥物料經振動篩篩分，篩上的大顆粒經粉碎機粉碎後重新篩分，最後混合，即得金黴素預混劑。

優選的，所述種子培養基按質量百分濃度計由以下組分組成：硫酸銨0.4-0.5%、碳酸鈣0.4%、玉米澱粉3.6-4%、硫酸鎂0.02%、花生餅粉1.6-1.8%、磷酸二氫鉀0.03%、氯化鈉0.12%、黃豆餅粉1.3-1.5%、植物油或豆油0.5%、酵母粉1.0-1.1%、餘量為水。

優選的，所述發酵培養基按質量百分濃度計由以下組分組成：澱粉酶0.006%、硫酸銨0.88%、消泡劑0.02%、碳酸鈣0.6%、氯化鈣0.6%、玉米澱粉6.05%、玉米漿1.4-1.8%、硫酸鎂0.16%、花生餅粉1.7%、磷酸二氫鉀0.03%、氯化鈉0.22%、黃豆餅粉1.0-1.5%、植物油或豆油0.2%、酵母粉0.8-1.2%、餘量為水。

優選的，所述補料培養基按質量百分濃度計由以下組分組成：澱粉酶0.03%、硫酸銨0.25%、消泡劑0.03%、碳酸鈣0.375%、氯化鈣0.25%、玉米澱粉40%、玉米漿1.7-2.0%、氯化鈉0.375%、植物油或豆油0.075%、餘量為水。

更優選的，所述金黴素預混劑的製備方法包括以下步驟：

a．種子培養：將金色鏈黴菌（Streptomyces aureofaciens）斜面孢子懸浮液接種入種子罐，用種子培養基在溫度30-33℃、通氣量1:1.5-2.0v/v/分鐘、罐壓0.03-0.05兆帕、攪拌速度150-230轉/分鐘的條件下培養24小時；

所述種子培養基按質量百分濃度計由以下組分組成：硫酸銨0.42%、碳酸鈣0.4%、玉米澱粉3.67%、硫酸鎂0.02%、花生餅粉1.67%、磷酸二氫鉀0.03%、氯化鈉0.12%、黃豆餅粉1.33%、植物油0.5%、酵母粉1.04%、餘量為水；

b．發酵培養：將步驟a製得的種子培養液接入發酵罐，用發酵培養基在溫度28-33℃、通氣量1:0.8-1.0v/v/分鐘、罐壓0.02-0.05兆帕、攪拌速度120-180轉/分鐘的條件下發酵培養85小時，在發酵培養過程中通過添加氨水確保發酵液pH在5.6-6.2之間，並根據發酵液的總糖濃度和總糖濃度控制指標添加補料培養基；

所述總糖濃度控制指標為：發酵培養0-40小時控制總糖質量百分濃度不低於4.0%，發酵培養40-80小時控制總糖質量百分濃度低於4.0%但高於2.5%，發酵培養80小時後控制總糖質量百分濃度不高於2.5%；

所述發酵培養基按質量百分濃度計由以下組分組成：澱粉酶0.006%、硫酸銨0.88%、消泡劑0.02%、碳酸鈣0.6%、氯化鈣0.6%、玉米澱粉6.05%、玉米漿1.4%、硫酸鎂0.16%、花生餅粉1.7%、磷酸二氫鉀0.03%、氯化鈉0.22%、黃豆餅粉1%、植物油0.2%、酵母粉0.88%、餘量為水；

所述補料培養基按質量百分濃度計由以下組分組成：澱粉酶0.03%、硫酸銨0.25%、消泡劑0.03%、碳酸鈣0.375%、氯化鈣0.25%、玉米澱粉40%、玉米漿1.7%、氯化鈉0.375%、植物油0.075%、餘量為水；

c．提取：取步驟b製得的發酵液，加入相當於發酵液體積5%的碳酸鈣，攪拌30分鐘，板框壓濾，壓濾完畢後，將板框濾餅在進風溫度240℃、排風溫度110℃條件下進行旋轉閃蒸乾燥，乾燥物料經振動篩篩分，篩上的大顆粒經粉碎機粉碎後重新篩分，最後混合，即得金黴素預混劑。

更優選的，所述金黴素預混劑的製備方法包括以下步驟：

a．種子培養：將金色鏈黴菌（Streptomyces aureofaciens）斜面孢子懸浮液接種入種子罐，用種子培養基在溫度30-33℃、通氣量1:1.5-2.0v/v/分鐘、罐壓0.03-0.05兆帕、攪拌速度150-230轉/分鐘的條件下培養24小時；

所述種子培養基按質量百分濃度計由以下組分組成：硫酸銨0.5%、碳酸鈣0.4%、玉米澱粉4%、硫酸鎂0.02%、花生餅粉1.8%、磷酸二氫鉀0.03%、氯化鈉0.12%、黃豆餅粉1.5%、植物油或豆油0.5%、酵母粉1.1%、餘量為水；

b．發酵培養：將步驟a製得的種子培養液接入發酵罐，用發酵培養基在溫度28-33℃、通氣量1:0.8-1.0v/v/分鐘、罐壓0.02-0.05兆帕、攪拌速度120-180轉/分鐘的條件下發酵培養85小時，在發酵培養過程中通過添加氨水確保發酵液pH在5.6-6.2之間，並根據發酵液的總糖濃度和總糖濃度控制指標添加補料培養基；

所述總糖濃度控制指標為：發酵培養0-40小時控制總糖質量百分濃度不低於4.0%，發酵培養40-80小時控制總糖質量百分濃度低於4.0%但高於2.5%，發酵培養80小時後控制總糖質量百分濃度不高於2.5%；

所述發酵培養基按質量百分濃度計由以下組分組成：澱粉酶0.006%、硫酸銨0.88%、消泡劑0.02%、碳酸鈣0.6%、氯化鈣0.6%、玉米澱粉6.05%、玉米漿1.8%、硫酸鎂0.16%、花生餅粉1.7%、磷酸二氫鉀0.03%、氯化鈉0.22%、黃豆餅粉1.5%、植物油0.2%、酵母粉1.20%、餘量為水；

所述補料培養基按質量百分濃度計由以下組分組成：澱粉酶0.03%、硫酸銨0.25%、消泡劑0.03%、碳酸鈣0.375%、氯化鈣0.25%、玉米澱粉40%、玉米漿2.0%、氯化鈉0.375%、植物油0.075%、餘量為水；

c．提取：取步驟b製得的發酵液，加入相當於發酵液體積1%的碳酸鈣，攪拌30分鐘，板框壓濾，壓濾完畢後，將板框濾餅在進風溫度230℃、排風溫度105℃條件下進行旋轉閃蒸乾燥，乾燥物料經振動篩篩分，篩上的大顆粒經粉碎機粉碎後重新篩分，最後混合，即得金黴素預混劑。

在該發明的種子培養基、發酵培養基和補料培養基中，硫酸銨、玉米蛋白、玉米漿、花生餅粉、黃豆餅粉和酵母粉為氮源，玉米澱粉、葡萄糖、植物油和豆油為碳源，澱粉酶為生物催化劑，氯化鈣、硫酸鎂、磷酸二氫鉀和氯化鈉為激活劑，碳酸鈣為緩衝劑，此外，植物油和豆油還兼作消沫劑。

在種子培養過程中，種子生長8小時後，可每隔4小時取樣檢測無菌情況，同時顯微觀察菌體及細胞生長情況。在種子培養基滅菌後，可取樣測定pH值、總糖和氨基氮，接種3小時後重複測試1次，當種子生長到20-26小時（生長末期），再次取樣測定pH值、總糖、氨基氮、效價和菌絲濃度。當種子培養液達到如下質控指標時即可移種入發酵罐進行發酵培養。

種子培養液質控指標
參數	參數值
種齡	20-26小時
pH	6.0-6.2
效價	＞50U/毫升
菌絲濃度	≥15%以上
鏡檢	菌絲密網狀分節，菌絲粗壯，無雜菌

在發酵培養過程中，由於一系列酶的催化作用，產生菌在不斷生長代謝，使培養基的性質、含量等不斷變化，及時掌握這些代謝變化情況並加以適當控制，有利於抗生素的生物合成。因此，必須進行發酵過程的中間分析，以明確菌絲的變化以及培養基各主要成分的含量、pH的變化，及時調整和控制，使發酵沿著有利於提高產量、質量的方向進行。在該發明中，發酵周期通常為80-135小時，有時為提取高含量產品，發酵周期最多可延長至160小時。在發酵過程中，應對pH值進行連續檢測並及時添加氨水以保證發酵液pH值在5.6-6.2之間；同時，為了保證微生物的營養條件，還應每6小時取樣測定總糖，並根據總糖濃度控制指標及時添加補料培養基。當發酵液達到如下質控指標時，發酵過程結束。

發酵液質控指標
參數	參數值
總效價	≥16000U/毫升
四環素效價	≤8%
總糖	<3.0%
漏斗對速	≥3毫升/5分鐘

在提取過程中，碳酸鈣的具體加入量可根據發酵液的效價和最終產品中金黴素的標示量計算而得。

有益效果

該發明提供了一種改進的製備金黴素預混劑的方法，是將金色鏈黴菌採用純種二級發酵培養，培養基採用實罐滅菌法，在整個培養過程中嚴格保持無菌狀態並保持一定的罐溫、罐壓，通入無菌空氣並不斷攪拌，根據發酵代謝過程中的pH和糖量變化，採用通氨和補料的方式保持一定的酸鹼度及營養，所得發酵液再經過鈣化、板框壓濾、旋轉閃蒸乾燥、粉碎、過篩、混合等過程，最終製得金黴素預混劑。該方法大大提高了發酵單位和提取收率，提高了產品質量和金黴素含量，同時生產工藝簡單、快速、穩定。

首先，該發明從培養基和金色鏈黴菌的代謝機理等方面出發，通過實驗研究了不同因素如溫度、通氣量、pH、種齡、補料方式等對金色鏈黴菌生長的影響以及添加金屬離子等對金黴素發酵的影響，最佳化了培養基的配方，確定了工藝的關鍵控制點，最終獲得了穩定的適合金黴素生產的最佳工藝，大大提高了發酵單位和金黴素產量。在發酵過程中溫度對生長和生產的影響是不同的，一般發酵溫度升高酶反應速率增大，生長代謝加快，生產期提前，但酶本身很易因過熱而失去活性，表現在菌體容易衰老，發酵周期縮短，影響最終產量。溫度除了直接影響過程的各種反應速率外，還通過改變發酵液的物理性質間接影響產物的合成，有時還影響生物合成的方向。因此，嚴格保持菌種生長繁殖和抗生素合成所需的最適溫度，有利於穩定發酵過程、縮短發酵周期、提高發酵單位、增加抗生素產量。金黴素在發酵過程中對溶氧極為敏感，通常要求控制溶氧值不低於20%，改善通氣環境一般有利於金黴素的合成。在發酵過程中，為了加速氧的溶解，該發明設定機械攪拌使氣流分散，並最佳化了通氣量。產生菌的生長代謝和抗生素合成都是由一系列酶催化反應的結果，pH是影響酶活性的重要條件，在不同的pH環境中，各種酶的活力不同，產生菌對培養基的分解利用就不同，合成抗生素的能力也不同，從而影響抗生素的產量。該發明首先調整好培養基中生理酸性和生理鹼性物質的用量以保證發酵過程pH適當，同時在發酵過程中嚴格控制酸鹼度的變化，防止累積有機酸使pH下降。種齡指種子罐中的培養物移到發酵罐時的培養時間。選擇適當的種齡十分重要，太年輕的種子接種後往往前期生長緩慢，導致整個發酵周期延長，產物開始形成時間推遲；太老的種子雖然菌量較多，但接種後會導致生產能力下降，菌體過早衰退。為了保證微生物的營養條件，發酵過程中需進行補料，補料方式有一次性補料和分批補料，一次性補料雖然操作簡便，但會使發酵液瞬時大量稀釋，擾亂菌的生理代謝，難於控制過程在最適於生產的狀態，分批補料雖然操作稍顯麻煩，但這種方法比一次性補料合理，該發明通過控制殘糖濃度進行分批補料。

其次，該發明改進了提取過程中的板框過濾和乾燥工藝。2012年10月前已有技術中，金黴素發酵液經板框過濾後，通常進行強力乾燥，存在能耗高、乾燥效率低、效價損失嚴重，差向金黴素等雜質含量增加，金黴素收率低等缺點，嚴重影響產品質量和工藝流程的順暢。該發明改用全自動板框壓濾設備、旋轉閃蒸乾燥，明顯加快了發酵液壓濾速度、乾燥速度，不僅勞動強度明顯下降，而且減少了效價損失，差向金黴素等雜質少，提高了終產品的金黴素含量，金黴素收率﹥98%。

權利要求

1.《金黴素預混劑的製備方法》其特徵在於，包括以下步驟：

a．種子培養：將金色鏈黴菌（Streptomyces aureofaciens）斜面孢子懸浮液接種入種子罐，用種子培養基在溫度30-33℃、通氣量1:1.5-2.0v/v/分鐘、罐壓0.03-0.05兆帕、攪拌速度150-230轉/分鐘的條件下培養20-26小時；

所述種子培養基按質量百分濃度計由以下組分組成：澱粉酶0-0.05%、硫酸銨0.2-0.6%、碳酸鈣0.2-0.6%、氯化鈣0-0.3%、玉米蛋白0-1%、玉米澱粉3-5%、玉米漿0-0.8%、葡萄糖0-0.6%、硫酸鎂0.02-0.04%、花生餅粉0-4%、磷酸二氫鉀0.01-0.06%、氯化鈉0-0.3%、黃豆餅粉0-4%、植物油或豆油0-0.6%、酵母粉0-2%、餘量為水；

b．發酵培養：將步驟a製得的種子培養液接入發酵罐，用發酵培養基在溫度28-33℃、通氣量1:0.8-1.0v/v/分鐘、罐壓0.02-0.05兆帕、攪拌速度120-180轉/分鐘的條件下發酵培養80-160小時，在發酵培養過程中通過添加氨水確保發酵液pH在5.6-6.2之間，並根據發酵液的總糖濃度和總糖濃度控制指標添加補料培養基；

所述總糖濃度控制指標為：發酵培養0-40小時控制總糖質量百分濃度不低於4.0%，發酵培養40-80小時控制總糖質量百分濃度低於4.0%但高於2.5%，發酵培養80小時後控制總糖質量百分濃度不高於2.5%；

所述發酵培養基按質量百分濃度計由以下組分組成：澱粉酶0.002-0.02%、硫酸銨0.5-1%、消泡劑0-0.06%、碳酸鈣0.4-0.7%、氯化鈣0-1%、玉米蛋白0-1%、玉米澱粉0-8%、玉米漿0-2%、葡萄糖0-1%、硫酸鎂0.001-0.3%、花生餅粉0-4%、磷酸二氫鉀0.01-0.03%、氯化鈉0.1-0.4%、黃豆餅粉0-5%、植物油或豆油0-0.3%、酵母粉0-2%、餘量為水；

所述補料培養基按質量百分濃度計由以下組分組成：澱粉酶0-0.08%、硫酸銨0-0.7%、消泡劑0.02-0.08%、碳酸鈣0.2-0.6%、氯化鈣0-1.0%、玉米蛋白0-1.0%、玉米澱粉0-50%、玉米漿0-2.6%、葡萄糖0-0.6%、硫酸鎂0-0.03%、花生餅粉0-1%、磷酸二氫鉀0-0.02%、氯化鈉0.2-0.5%、黃豆餅粉0-1%、植物油或豆油0-0.6%、酵母粉0-0.5%、餘量為水；

c．提取：取步驟b製得的發酵液，加入相當於發酵液體積0-12%的碳酸鈣，攪拌20-40分鐘，板框壓濾，壓濾完畢後，將板框濾餅在進風溫度210-260℃、排風溫度90-120℃條件下進行旋轉閃蒸乾燥，乾燥物料經振動篩篩分，篩上的大顆粒經粉碎機粉碎後重新篩分，最後混合，即得金黴素預混劑。

實施方式

實施例1、金黴素預混劑的製備

a．種子培養

在配料罐中配製種子培養基，按質量百分濃度計由以下組分組成：硫酸銨0.42%、碳酸鈣0.4%、玉米澱粉3.67%、硫酸鎂0.02%、花生餅粉1.67%、磷酸二氫鉀0.03%、氯化鈉0.12%、黃豆餅粉1.33%、植物油0.5%、酵母粉1.04%、餘量為水；

將配好的種子培養基用泵打入種子罐中，封閉罐孔，通入蒸氣，在溫度120±1℃、壓力0.11-0.12兆帕條件下保持30分鐘滅菌，關閉蒸氣，然後通入無菌空氣保持罐正壓，並立即用冷卻水降溫至31±1℃待接種；將金色鏈黴菌（Streptomyces aureofaciens）斜面孢子懸浮液用接種針注入種子罐，然後在溫度30-33℃、通氣量1:1.5-2.0v/v/分鐘、罐壓0.03-0.05兆帕、攪拌速度150-230轉/分鐘的條件下培養24小時（具體溫度依據菌種的生長速度來控制，通氣量、罐壓和攪拌速度根據溶氧值來調整），取樣檢測；

檢測結果：外觀呈淺黃色、稠，pH值為6.08，總糖5.5%，氨基氮88.4毫克/100毫升，效價55U/毫升，菌絲濃度27%，菌絲形態呈網狀、中分節、粗壯，無雜菌，達到種子培養液質控指標；

b．發酵培養

在配料罐中配製發酵培養基，按質量百分濃度計由以下組分組成：澱粉酶0.006%、硫酸銨0.88%、消泡劑（泡敵）0.02%、碳酸鈣0.60%、氯化鈣0.60%、玉米澱粉6.05%、玉米漿1.40%、硫酸鎂0.16%、花生餅粉1.7%、磷酸二氫鉀0.03%、氯化鈉0.22%、黃豆餅粉1.00%、植物油0.2%、酵母粉0.88%、餘量為水；

在配料罐中配製補料培養基，按質量百分濃度計由以下組分組成：澱粉酶0.03%、硫酸銨0.25%、消泡劑（泡敵）0.03%、碳酸鈣0.375%、氯化鈣0.25%、玉米澱粉40%、玉米漿1.7%、氯化鈉0.375%、植物油0.075%、餘量為水；隨後將配好的補料培養基用泵打入補料罐中，封閉罐孔，通入蒸氣，先升溫至65℃保持45分鐘，再在溫度120±1℃、壓力0.11-0.12兆帕條件下保持30分鐘滅菌，關閉蒸氣，然後通入無菌空氣保持罐正壓，並立即用冷卻水降溫至31±1℃待補料；

將配好的發酵培養基用泵打入發酵罐中，封閉罐孔，通入蒸氣，先升溫至75℃保持20分鐘，再在溫度120±1℃、壓力0.11-0.12兆帕條件下保持30分鐘滅菌，關閉蒸氣，然後通入無菌空氣保持罐正壓，並立即用冷卻水降溫至31±1℃待接種；將步驟a製得的合格的種子培養液接入發酵罐，接種量為15%，在溫度28-33℃、通氣量1:0.8-1.0v/v/分鐘、罐壓0.02-0.05兆帕、攪拌速度120-180轉/分鐘的條件下發酵培養（具體溫度依據菌種的生長速度來控制，通氣量、罐壓和攪拌速度根據溶氧值來調整），在培養過程中，對pH值進行連續檢測並及時添加氨水以保證發酵液pH值在5.6-6.2之間，並每6小時取樣測定總糖濃度，根據總糖濃度控制指標及時添加補料罐中的補料培養基；總糖濃度控制指標為：發酵培養0-40小時總糖質量百分濃度不低於4.0%，發酵培養40-80小時總糖質量百分濃度低於4.0%但高於2.5%，發酵培養80小時後總糖質量百分濃度不高於2.5%；發酵培養85小時後，取樣檢測；

檢測結果：pH值為6.00，總糖1.2%，氨基氮75毫克/100毫升，總效價21080U/毫升，四環素效價1200U/毫升，濾速15毫升/5分鐘，達到發酵液質控指標；

c．提取

取發酵液，加入相當於發酵液體積5%的碳酸鈣，攪拌30分鐘，取樣檢測料液效價200U/毫升，然後用全自動板框壓濾設備進行板框壓濾，初始壓力調整到0.1Mpa以下，在過濾過程中逐步提高壓力，但最高壓力不超過0.6Mpa，壓濾完畢後，將板框濾餅在進風溫度240℃、排風溫度110℃條件下進行旋轉閃蒸乾燥，乾燥物料經振動篩篩分，篩上的大顆粒經粉碎機粉碎後重新篩分，最後混合，即得金黴素預混劑，取樣檢測。

檢測結果：金黴素含量15.5%、四環素含量3.1%、差向金黴素含量0.75%。

實施例2、金黴素預混劑的製備

a．種子培養

在配料罐中配製種子培養基，按質量百分濃度計由以下組分組成：硫酸銨0.5%、碳酸鈣0.4%、玉米澱粉4.0%、硫酸鎂0.02%、花生餅粉1.8%、磷酸二氫鉀0.03%、氯化鈉0.12%、黃豆餅粉1.5%、植物油或豆油0.5%、酵母粉1.10%、餘量為水；

將配好的種子培養基用泵打入種子罐中，封閉罐孔，通入蒸氣，在溫度120±1℃、壓力0.11-0.12兆帕條件下保持30分鐘滅菌，關閉蒸氣，然後通入無菌空氣保持罐正壓，並立即用冷卻水降溫至31±1℃待接種；將金色鏈黴菌（Streptomyces aureofaciens）斜面孢子懸浮液用接種針注入種子罐，然後在溫度30-33℃、通氣量1:1.5-2.0v/v/分鐘、罐壓0.03-0.05兆帕、攪拌速度150-230轉/分鐘的條件下培養24小時（具體溫度依據菌種的生長速度來控制，通氣量、罐壓和攪拌速度根據溶氧值來調整），取樣檢測；

檢測結果：外觀呈淺黃色、稠，pH值為5.90，總糖4.5%，氨基氮78.5毫克/100毫升，效價55U/毫升，菌絲濃度25%，菌絲形態呈網狀、中分節、粗壯，無雜菌，達到種子培養液質控指標；

b．發酵培養

在配料罐中配製發酵培養基，按質量百分濃度計由以下組分組成：澱粉酶0.006%、硫酸銨0.88%、消泡劑（泡敵）0.02%、碳酸鈣0.60%、氯化鈣0.60%、玉米澱粉6.05%、玉米漿1.80%、硫酸鎂0.16%、花生餅粉1.7%、磷酸二氫鉀0.03%、氯化鈉0.22%、黃豆餅粉1.50%、植物油0.2%、酵母粉1.20%、餘量為水；

在配料罐中配製補料培養基，按質量百分濃度計由以下組分組成：澱粉酶0.03%、硫酸銨0.25%、消泡劑（泡敵）0.03%、碳酸鈣0.375%、氯化鈣0.25%、玉米澱粉40%、玉米漿2.0%、氯化鈉0.375%、植物油0.075%、餘量為水；隨後將配好的補料培養基用泵打入補料罐中，封閉罐孔，通入蒸氣，先升溫至65℃保持45分鐘，再在溫度120±1℃、壓力0.11-0.12兆帕條件下保持30分鐘滅菌，關閉蒸氣，然後通入無菌空氣保持罐正壓，並立即通入冷卻水降溫至31±1℃待補料；

將配好的發酵培養基用泵打入發酵罐中，封閉罐孔，通入蒸氣，先升溫至75℃保持20分鐘，再在溫度120±1℃、壓力0.11-0.12兆帕條件下保持30分鐘滅菌，關閉蒸氣，然後通入無菌空氣保持罐正壓，並立即通入冷卻水降溫至31±1℃待接種；將步驟a製得的合格的種子培養液接入發酵罐，接種量為20%，在溫度28-33℃、通氣量1:0.8-1.0v/v/分鐘、罐壓0.02-0.05兆帕、攪拌速度120-180轉/分鐘的條件下發酵培養（具體溫度依據菌種的生長速度來控制，通氣量、罐壓和攪拌速度根據溶氧值來調整），在培養過程中，對pH值進行連續檢測並及時添加氨水以保證發酵液pH值在5.6-6.2之間，並每6小時取樣測定總糖濃度，根據總糖濃度控制指標及時添加補料罐中的補料培養基；總糖濃度控制指標為：發酵培養0-40小時總糖質量百分濃度不低於4.0%，發酵培養40-80小時總糖質量百分濃度低於4.0%但高於2.5%，發酵培養80小時後總糖質量百分濃度不高於2.5%；發酵培養115小時後，取樣檢測；

檢測結果：pH值為5.89，總糖1.1%，氨基氮87毫克/100毫升，總效價24850U/毫升，四環素效價1358U/毫升，濾速16毫升/5分鐘，達到發酵液質控指標；

c．提取

取發酵液，加入相當於發酵液體積1%的碳酸鈣，攪拌30分鐘，取樣檢測料液效價250U/毫升，然後用全自動板框壓濾設備進行板框壓濾，初始壓力調整到0.1Mpa以下，在過濾過程中逐步提高壓力，但最高壓力不超過0.6Mpa，壓濾完畢後，將板框濾餅在進風溫度230℃、排風溫度105℃條件下進行旋轉閃蒸乾燥，乾燥物料經振動篩篩分，篩上的大顆粒經粉碎機粉碎後重新篩分，最後混合，即得金黴素預混劑，取樣檢測。

檢測結果：金黴素含量23.3%、四環素含量2.8%、差向金黴素含量0.8%。

與實施例1相比，由於實施例2的發酵周期更長，發酵單位效價更高，提取過程中加入的碳酸鈣更少，因此最終產品中金黴素的含量更高。

榮譽表彰

2014年11月6日，《金黴素預混劑的製備方法》獲得第十六屆中國專利優秀獎。

金黴素預混劑的製備方法

基本介紹

專利背景

發明內容

專利目的

技術方案

有益效果

權利要求

實施方式

榮譽表彰

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