《重組腺相關病毒載體的包裝機制- - 夭折信號假說研究》是依託華僑大學，由肖衛東擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：重組腺相關病毒載體的包裝機制- - 夭折信號假說研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：肖衛東
- 依託單位：華僑大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
重組腺相關病毒(rAAV)是歐美地區唯一上市基因藥物Glybera的載體。然而現有rAAV載體設計和製備方面存在諸多缺陷，制約了其在基礎研究和臨床套用等方面的推廣,闡明其包裝機制是開發和最佳化rAAV載體系統的關鍵。與目前研究主要集中在AAV本身基因及腺病毒基因等反式作用因子不同，本項目試圖闡明載體基因組上的順式作用元件在包裝過程中的作用。根據大量含不同基因載體包裝效率的巨大差異且存在大量不完整AAV顆粒這些現象，本項目提出了rAAV包裝的夭折信號假說，即病毒載體基因組上可能存在未知特異性序列，意外成為包裝終止信號，提前停止包裝，從而降低包裝效率和質量。本項目將通過高通量tSMS序列分析技術，在單分子/單病毒層次上通過對不同基因組、不同血清型、不同包裝系統中rAAV載體的序列分析，總結夭折信號特性，建立夭折信號資料庫,探明夭折信號產生的機制，並根據其機制消除夭折信號，最佳化載體設計和製備。
結題摘要
重組腺相關病毒載體(rAAV)在眾多臨床實驗取得成功並在歐美地區有多項上市的基因藥物。然而現有 rAAV 載體設計和製備方面存在諸多缺陷, 制約了其在基礎研究和臨床套用等方面的推廣, 闡明其包裝機制是開發和最佳化 rAAV 載體系統的關鍵。在過去四年中，本項目試圖闡明載體基因組上的順式作用元件在包裝過程中的作用。根據大量含不同基因載體包裝效率的巨大差異且存在大量不完整 AAV 顆粒這些現象, 通過高通量 tSMS 序列分析技術, 在單分子/單病毒層次上通過對不同基因組、不同血清型、不同包裝系統中 rAAV 載體的序列分析，驗證了原來提出的rAAV 包裝的“夭折信號假說”, 發現了病毒載體基因組上存在的特異性序列， 比如與AAV terminal resolution 位點的同源序列和能形成強二級結構的序列，都可以成為非正常的包裝終止信號, 導致載體提前停止包裝, 從而降低包裝效率和質量。 此外，AAV ITR是原經典的包裝起始信號，也是終止信號，大量的終止也出現在包裝起始位置，導致大量載體僅含ITR。 根據對夭折信號的發現和特性的總結對最佳化載體設計和製備提出新的建議，與AAV terminal resolution 位點的同源序列和能形成強二級結構的序列應該在AAV載體通過序列最佳化時消除。未來的研究方向應該開發新型包裝起始序列，消除AAV ITR同時作為起始信號和終止信號而成為產生不完整 AAV 顆粒的主要源頭。本項目為完善全新的、經濟的、高效的、無rcAAV污染的rAAV載體規模化製備系統提供主要的理論依據和使用價值。
