基本介紹
- 書名：醫學生物化學與分子生物學實驗技術（第2版）
- 作者：王玉明
- ISBN：9787302467205
- 定價：39.80元
- 出版社：清華大學出版社
- 出版時間：2017.07.01
醫學生物化學與分子生物學實驗技術(第2版）
作者：王玉明
定價：39.80元
印次：2-1
ISBN：9787302467205
出版日期：2017.07.01
印刷日期：2017.07.28
定價：39.80元
印次：2-1
ISBN：9787302467205
出版日期：2017.07.01
印刷日期：2017.07.28
本教材介紹了生物化學與分子生物學的常用實驗技術，包括大分子製備技術、分光光度技術、層析技術、電泳技術、離心技術、分子雜交技術、 PCR技術、測序技術、轉基因技術、基因敲除技術、蛋白質組學技術、 EMSA和 ChIP技術、酵母雙雜交技術等，以及實驗技術的發展簡史、技術創新、實驗室管理等內容。在介紹技術的同時還配有相應的實驗，以供學生在系統了解有關技術的同時進行實驗練習。
目錄
第1章 如何在分子水平研究生命.......1
第1節分子實驗技術簡史..........1
第2節分子實驗技術體系..........4
一、生物分子的分析鑑定.......4
二、生物分子的人工合成.......5
三、生物分子的人工改造.......5
四、生物分子的功能研究.......6
第3節分子實驗技術套用..........7
一、電泳技術在臨床檢驗中的套用...........7
二、DNA重組技術在醫藥衛生領域的擴展...........7
三、基因診療技術在未來醫學的前景...........8
四、動物模型在醫學研究中的重要地位.........9
第2章 從組織中分離純化生物大分子——大分子製備技術..........10
第1節材料預處理及細胞的分離........11
一、選擇材料及預處理.........11
二、細胞的分離.........11
第2節細胞破碎及細胞器分離12
一、細胞的破碎.........12
二、細胞器的分離.....13
第3節大分子的分離純化與測定........13
一、蛋白質的分離純化.........13
二、核酸的分離純化.14
三、蛋白質濃度的測定.........15
四、核酸的濃度、純度及完整性測定.........17
第4節生物大分子提純後的處理........18
一、大分子樣品的濃縮.........18
二、大分子樣品的乾燥.........18
三、大分子樣品的保存.........19
第5節實驗練習20
一、蛋白質的鹽析與透析.....20
二、蛋白質含量測定21
第3章 測定物質的吸收光譜——分光光度技術24
第1節 分光光度技術的基本原理........24
一、光的性質.24
二、光譜.........25
三、Lambert-Beer定律.........26
第2節 分光光度計的基本結構27
一、光源.........28
二、分光系統.28
三、樣品室.....29
四、檢測器.....29
五、顯示器.....30
第3節 常用分光光度計的使用方法....30
一、721型分光光度計..........30
二、721e型分光光度計........31
三、722s型分光光度計........31
四、SP-756紫外-可見分光光度計...31
第4節 分光光度技術的套用....31
一、溶液的定性分析.32
二、溶液的定量分析.32
第5節 實驗練習33
一、蛋白質的定量測定.........33
二、脲酶Km值測定..37
三、血清丙氨酸氨基轉移酶活性測定（賴氏法）...40
四、血糖的定量測定（葡萄糖氧化酶法）........42
五、激素對血糖濃度變化的影響.....43
六、血漿高密度脂蛋白-膽固醇的測定.....45
七、紫外分光光度法檢測核酸的濃度及純度.....46
第4章 將混合物中各種組分分開—— 層析技術48
第1節 層析技術概述....48
一、層析技術的形成和發展.48
二、層析技術的基本原理.....49
三、層析技術的分類.49
四、層析技術的基本要求.....50
第2節 吸附層析50
一、吸附層析的原理.50
二、吸附層析的操作.50
第3節 分配層析52
一、紙層析的原理.....52
二、紙層析的操作.....52
第4節 凝膠過濾層析....54
一、凝膠過濾層析的原理.....54
二、凝膠過濾層析的特徵常數.........54
三、凝膠過濾層析的常用介質.........55
四、凝膠過濾層析的操作.....56
五、凝膠過濾層析的套用.....57
第5節 離子交換層析....57
一、離子交換層析的原理.....57
二、離子交換劑.........58
三、離子交換層析的操作.....59
四、離子交換層析的套用.....61
第6節 親和層析61
一、親和層析的原理.61
二、親和層析的操作.62
第7節 實驗練習63
一、胺基酸的分離鑑定——紙層析法.........63
二、轉氨酶的活性鑑定——薄層層析法.........64
三、核苷酸的分離——離子交換柱層析法.....65
四、胰蛋白酶的分離純化——親和層析法.....67
五、血清蛋白質的層析分離——分子篩層析法.....68
第5章 分離帶電顆粒的有效手段—— 電泳技術69
第1節 電泳技術概述....69
一、電泳技術的形成和發展.69
二、電泳技術的基本原理.....70
第2節 影響電泳的因素71
一、溶液的pH...........71
二、緩衝液的離子強度.........71
三、電場強度.72 四、電滲作用.72
第3節 常用電泳技術....72
一、紙電泳和醋酸纖維素薄膜電泳.........72
二、凝膠電泳.73
三、等電聚焦電泳.....75
四、雙向電泳.76
五、核酸電泳.77
六、印跡轉移電泳.....79
第4節 實驗練習79
一、血清蛋白醋酸纖維素薄膜電泳.........79
二、血清乳酸脫氫酶同工酶瓊脂糖凝膠電泳.........81
三、血清脂蛋白瓊脂糖凝膠電泳.......82
四、SDS-聚丙烯醯胺凝膠電泳測定蛋白質的相對分子質量.........83
五、DNA瓊脂糖凝膠電泳...86
六、限制性內切酶對質粒DNA酶切產物的電泳鑑定.....87
第6章 利用離心場沉降大分子—— 離心技術90
第1節離心技術的基本原理....90
一、顆粒沉降的原理.90
二、沉降係數.91
三、相對離心力.........91
第2節 離心機的類型及操作規程........91
一、離心機的類型.....91
二、製備型離心機.....92
三、分析型離心機.....94
四、離心操作的注意事項.....94
第3節 製備型超速離心的分離方法....95
一、差速沉降離心法.95
二、密度梯度區帶離心法.......95
三、等密度梯度區帶離心法...96
第4節 實驗練習......96
一、肝糖原的提取和鑑定.......96
二、酪蛋白的製備.........97
三、動物肝臟DNA的提取....98
四、酵母RNA的提取及成分鑑定...100
五、質粒DNA的提取與鑑定........101
六、感受態細菌的製備及質粒 DNA的轉化.........104
七、蔗糖密度梯度離心分離病毒...106
第7章 利用鹼基互補探查核酸序列——分子雜交技術..109
第1節 核酸分子雜交的基本原理......109
一、變性與復性.109
二、建立在DNA變性與復性基礎上的核酸雜交技術.........110
第2節 核酸分子雜交的主要類型及程式...111
一、固相雜交的支持物.........111
二、常用的轉移方法...112
三、固相雜交的基本程式.....112
四、固相雜交的主要類型.....113
第3節 核酸探針的分類和標記114
一、核酸探針的分類...114
二、核酸探針的標記...115
第4節 實驗練習....117
一、Southern雜交.......117
二、Northern雜交.......118
三、組織原位雜交.......120
四、斑點雜交.....121
第8章 微量DNA的體外擴增—— PCR技術...123
第1節 PCR技術概述.....123
一、基本原理.....123 二、主要步驟.....123
三、主要特點.....124
第2節 PCR的反應體系及操作.........125
一、PCR反應體系......125
二、PCR的操作及注意事項125
三、PCR反應條件的最佳化....127
四、PCR產物的檢測分析....128
第3節 PCR的衍生技術.128
一、逆轉錄-PCR.........128
二、實時螢光定量PCR........129
三、特殊PCR....130
第4節 PCR技術的套用.132
一、分子生物學領域...132
二、臨床醫學領域.......133
三、其他領域.....134
第5節 實驗練習....134 逆轉錄PCR........134
第9章 閱讀遺傳天書的第一步——測序技術....137
第1節 DNA測序的基本原理..137
第2節 DNA測序的常用方法..138
一、酶學法——雙脫氧鏈終止法.........138
二、化學（裂解）法——Maxam-Gilbert測序法......140
三、酶學法與化學法的比較.141
第3節DNA測序自動化143
第4節實驗練習....144
雙脫氧鏈終止法測定DNA序列....144
轉基因技術.............147
第1節轉基因技術概述..............147
一、轉基因動物技術的原理...........147
二、轉基因動物技術的成果...........148 第2節建立轉基因動物的方法..........149
一、目的基因的製備.......................149
二、轉基因動物的製備方法...........149
三、轉基因小鼠................156
第3節轉基因動物的套用............156
一、研究基因的結構和功能及其表達與調控.............156
二、建立人類疾病動物模型...........157
三、研究人類疾病基因治療...........157
四、利用轉基因動物生產生物活性蛋白............157
五、利用轉基因動物生產人用器官移植的供體.........158
六、利用轉基因技術改良動物品種和生產性能 .....158
第4節轉基因的安全性問題.....159
一、轉基因生物的安全性......159
二、轉基因食品的安全性..........159
第5節實驗練習...........160
一、轉基因動物技術中外源基因的製備.........160
二、顯微注射.....161
第11章 置換生物體的某種基因——基因打靶技術........165
第1節基因敲除技術概述...165
一、基因敲除技術的建立和發展.............165
二、基因敲除的基本原理167
第2節基因敲除的方法及進展..........170
一、條件性基因敲除法....170
二、誘導性基因敲除法....171
三、利用隨機插入突變進行基因敲除.............171
第3節基因敲除小鼠的製備過程......174
一、目標載體的構建........174
二、ES細胞培養..............174
三、ES細胞的轉化..........175
四、挑克隆.........175
五、抗性ES細胞克隆的凍存........175
六、ES細胞基因組DNA的提取.............175
七、克隆的分析和鑑定....175
八、染色體分析.176
九、嵌合體小鼠的製備....176
十、品系的建立.176
第4節基因敲除技術的套用及缺陷...177
一、基因敲除技術的套用177
二、基因敲除技術的缺陷178
第12章 21世紀的生命科學技術—— 蛋白質組學技術....180
第1節 蛋白質組學概論.......180
一、蛋白質組學.180
二、蛋白質組學研究的策略和範圍.............182
三、蛋白質組學發展趨勢182
第2節 蛋白質組學技術.......183
一、樣品製備.....183 二、樣品分離技術............184
三、樣品鑑定技術............190
第3節 蛋白質組生物信息學..............195
第4節 實驗練習....196
一、家兔血清蛋白質組二維凝膠電泳技術的建立........196
二、正常人尿蛋白質組學研究.......198
第13章 蛋白質與核酸相互作用分析——EMSA和ChIP技術.....200
第1節 電泳遷移阻滯實驗（EMSA）...200
一、電泳遷移阻滯實驗（EMSA）的基本原理.200
二、電泳遷移阻滯實驗（EMSA）的基本操作步驟........200
第2節 染色質免疫沉澱（ChIP）技術............202
一、染色質免疫沉澱（ChIP）技術的基本原理.202
二、染色質免疫沉澱（ChIP）技術的基本操作步驟........202
第3節 實驗練習....204
一、經EMSA驗證薑黃素可減少B淋巴細胞核中NF-κB的量.....204
二、經ChIP驗證薑黃素可減少B淋巴細胞核中NF-κB的量.....207
第14章 蛋白質和蛋白質相互作用分析——酵母雙雜交等技術....211
第1節 概述............211
一、蛋白質相互作用的分子結構基礎.............211
二、蛋白質相互作用分析的意義...212
三、相互作用蛋白質組學的研究技術平台.....213
第2節 酵母雙雜交技術.......215
一、酵母雙雜交系統的原理...........215
二、酵母雙雜交系統的套用...........216
三、酵母細胞內的高通量酵母
雙雜交.........216
四、酵母雙雜交系統的幾個版本...216
五、酵母雙雜交系統的假陽性
問題.............217
第3節 其他常用技術...........217
一、細菌雙雜交技術........217
二、噬菌體展示技術........218
三、依賴親和力篩選相互作用
蛋白質的技術...............219
四、蛋白質晶片技術.........221
第4節 實驗練習.............222
一、酵母雙雜交技術篩選TRAC-1相互作用蛋白.............222
二、GST融合蛋白沉降技術篩選RNF114相互作用蛋白............226
第15章 科學發展的不竭源泉——技術創新..............230
第1節 “三性”實驗................230
一、“三性”實驗的概念.................230
二、“三性”實驗的特點和意義.....230
三、實驗教學體系的改革...............231
四、“三性”實驗的基本要求.........232
五、“三性”實驗的一般程式.........232
六、“三性”實驗的選題原則.........232
七、“三性”實驗的實施及評估.....233
第2節 實驗練習.................233
一、酵母蔗糖酶的純化及性質研究................233
二、豬胰蛋白酶的純化及其活性測定..............238
三、DNA重組實驗...........241
實驗室管理...................................249
第1節實驗室規則..............................249
第2節實驗用品的清洗......................250
一、玻璃儀器的清洗.......................250
二、塑膠器皿的清洗.......................251
三、實驗器皿的乾燥與消毒...........251
四、常用洗滌液及其配製...............251
第3節實驗標本的製備......................252
一、血液樣品的製備與保存...........252
二、尿液標本的收集與保存...........253
三、組織樣品的製備與保存...........253
第4節實驗儀器的使用......................254
一、刻度吸管的使用.......................254
二、微量進樣器的使用...................255
三、單道可調式移液器的使用.......256
四、蒸汽壓力滅菌器的使用...........256
五、酸度計的使用...........................256
六、乾燥箱和恆溫箱的使用...........258
七、電熱恆溫水浴鍋的使用...........259
第5節實驗數據的處理......................259
一、列表法.......................................259
二、作圖法.......................................260
三、少量實驗數據的處理...............261
四、實驗誤差和提高實驗準確度的方法.....................261
第6節實驗報告的書寫......................263
一、實驗記錄...................................263
一、一般化學試劑的分級及配製的注意事項.............264
二、實驗室中常用酸鹼的密度和濃度...............266
三、常用緩衝溶液及配製方法.......266
四、溴化乙錠溶液的淨化處理.......271
五、離心機轉數與相對離心力的換算....................272
六、硫酸銨飽和度的常用表...........273
七、元素相對原子質量表...............275
二、實驗報告...................................263
參考文獻...............................277
第7節常用實驗數據...............264
