酶活性測定法

測定方式

酶促反應速度的測定可採用兩種方式：

一、測定完成一定量反應所需的時間；二、測定單位時間內的酶促反應量。前者稱為終點法，後者稱為動力學法。

該方式是在特定條件下，將樣品中要檢知的酶作用一定量的底物，然後根據反應進行到某一程度(即達到某一指標)所需要的時間長短來估計酶的活力。

其一個發展是採用檢測器對反應進行連續跟蹤，並在反應達到某一程度時，精確地自動記錄所需要的時間，這就是酶分析自動化中的固定濃度法；另一個發展是作成簡便的酶檢測紙片。

該方式測定原理是：在一定條件下，酶促反應速度和酶濃度成正比，因此測得反應速度就需要求得酶濃度。待測的酶濃度是影響反應速度的唯一因素，其他因素都應處於最適於酶發揮催化作用的水平，為此應選擇適宜的底物濃度、緩衝體系、溫度，並向反應系統中添加必要的輔助因子。

常用的測定方法有取樣法和連續法。

取樣法是在酶反應開始後不同的時間，從反應系統中取出一定量的反應液，並用適當方法停止其反應，再根據產物和底物在化學性質上的差別進行分析，求得單位時間內酶促反應的變化量。

連續法則是基於底物和產物在物理化學性質上的不同，在反應過程中對反應系統添加酶的變性劑以終止反應。常用的連續測定法是光吸收測定法，即根據產物和底物在某一波長或波段上有明顯的特徵吸收差別而建立起來的連續觀測方法。幾乎所有的氧化還原酶都可用此法測定，此外如螢光法、旋光法、電化學法也是常用的連續測定方法。

對不易直接測定的反應，可使用酶偶聯分析法，即用過量、專一的“偶聯工具酶”，使被測反應繼續進行到某一可直接測定的階段。

近年來，酶活性的測定工作正向兩個方向發展，一是超微量酶活的靈敏測定，二是實現測定過程的自動化控制。