基本介紹
- 中文名：酵母單雜交
- 對象：蛋白質
- 流程1：篩選含有報告基因的酵母單細胞株
- 流程2：構建表達文庫
基本信息,缺點,
基本信息
酵母單雜交技術最早是1993年由Li等從酵母雙雜交技術發展而來，通過對報告基因的表型檢測，分析DNA與蛋白之間的相互作用，以研究真核細胞內的基因表達調控。由於酵母單雜交方法檢測特定轉錄因子與順式作用元件專一性相互作用的敏感性和可靠性，現已被廣泛用於克隆細胞中含量微弱的、用生化手段難以純化的特定轉錄因子。
酵母單雜交(Yeast one-hybrid)是根據DNA結合蛋白(即轉錄因子)與DNA順式作用元件結合調控報告基因表達的原理，克隆與靶元件特異結合的轉錄因子基因(cDNA)的有效方法。其理論基礎是：許多真核生物的轉錄激活子由物理和功能上獨立的DNA結合區(DNA-binding domain BD)和轉錄激活區(Activation domain AD)組成，因此可構建各種基因與AD的融合表達載體，在酵母中表達為融合蛋白時，根據報導基因的表達情況，便能篩選出與靶元件有特異結合區域的蛋白。理論上，在單雜交檢測中，任何靶元件都可被用於篩選一種與之有特異結合區域的蛋白。
缺點
由於插入的靶元件與酵母內源轉錄激活因子可能發生相互作用，或插入的靶元件不需要轉錄激活因子就可以激活報告基因的轉錄，因此往往產生假陽性結果。如果酵母表達的AD融合蛋白對細胞有毒性，或融合蛋白在宿主細胞內不能穩定地表達，或融合蛋白發生錯誤摺疊，或者不能定位於酵母細胞核內，以及融合的Gal4AD封閉了蛋白質上與DNA相互作用的位點，則都可能幹擾AD融合蛋白結合於靶元件的能力，從而產生假陰性結果。
