增大接種量是提高菌濃的有效、快捷的方法,但由於種子罐的體積已定,無法通過加大種子培養液的體積來增大接種量,因此選擇通過倒種增大接種量,在生產實踐中檢驗模型的預測能力。
簡介,影印接種法,
簡介
增大接種量是提高菌濃的有效、快捷的方法,但由於種子罐的體積已定,無法通過加大種子培養液的體積來增大接種量,因此選擇通過倒種增大接種量,在生產實踐中檢驗模型的預測能力。將對照與倒種的罐批發酵前期的菌濃與pH的最高值和最低值輸入模型,預測60h的效價,結果見Tab.3,相對誤差為2.5687%和-9.3267%,通過倒種法60h效價比對照提高了35.3%,放罐時效價為33773u/ml,比對照提高了11.8%。
改變培養基碳源――葡萄糖代替糊精50L罐上發酵生產頭孢菌素C倒種法雖然是提高菌量的有效方法,但在實際操作中增大了染菌的風險,因此根據搖瓶實驗的結果(數據未列出),在50L罐上考察葡萄糖部分替代糊精後頭孢菌素C的合成,以2%葡萄糖3%糊精代替原配方的5%的糊精,結果見Fig.2,在發酵前期pH迅速下降,下降後有兩次反彈,最高值620,最低值56,62h後pH通過流加氨水控制在550。RQ值的變化反映了底物利用的轉換,25h之前以葡萄糖和玉米漿中的還原糖為碳源,RQ值在09左右,之後以糖和豆油為混合碳源,表現在RQ值較之前降低,80h後完成糖與油利用的轉換,完全以油為碳源,RQ值穩定在06~07之間直到放罐。整個發酵過程DO都控制在30%以上,不存在氧限制問題。將對照與葡萄糖代替糊精的罐批早期的菌濃和pH數據輸入模型進行預測和驗證,結果見Tab.4,相對誤差分別是26876%和52653%。
影印接種法
具體過程是:將待測的懸液塗在合適的平板上,等其長好後作為母平板(每平板上的菌落控制在50~300個);用一小塊滅菌的絲絨固定在直徑較平板略小的圓柱形木塊上,構成印章(即接種工具);然後把長有菌落的母平板倒置在絲絨的印章上,輕輕印一下;再把此印章在另一含有選擇培養基的平板上輕輕印一下,經培養後,選擇培養基平板上長出的菌落與母平板上的菌落位置對應,比較影印平板與母平板上菌落生長情況,即可從相應位置的母平板上選出待測的突變型菌落。影印法最初是為證明微生物的抗藥性突變是自發的、與相應的環境因素無關而設計的實驗,目前已廣泛套用於營養缺陷型的篩選以及抗藥性菌株篩選等研究工作中。