《農藥樹狀抗原設計合成及多特異性抗體製備與特性研究》是依託華南農業大學，由沈玉棟擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：農藥樹狀抗原設計合成及多特異性抗體製備與特性研究
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：沈玉棟
- 依託單位：華南農業大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
基於樹狀抗原的多特異性抗體製備技術在小分子有機物免疫分析領域國內外未見報導。本項目以我國農產品中殘留問題突出的有機磷、氨基甲酸酯、擬除蟲菊酯3大類農藥中具有同類典型結構的對硫磷、異丙威和甲氰菊酯為對象，分別設計半抗原，進而利用樹狀分子合成同時攜帶上述3種農藥半抗原的並聯型和串聯型樹狀抗原，通過動物免疫，製備抗血清，鑑定其抗原識別活性；通過雜交瘤技術製備多特異性單克隆抗體，採用酶聯免疫吸附分析（ELISA）、螢光光譜（FS）、圓二色譜（CD）、軟電離質譜（如ESI/CSI-MS）、等溫滴定微量熱（VP-ITC）等手段，分析多特異性抗體性能，研究比較並聯、串聯型樹狀抗原免疫應答效應及構效關係，探討多特異性抗體與小分子農藥相互作用機制。本研究不但為創新農藥多殘留分析方法奠定基礎，而且為豐富小分子有機物多組分免疫檢測技術手段提供新的依據。
結題摘要
本項目以我國農產品中殘留問題突出的不同結構系農藥——對硫磷(PA)和氰戊菊酸(氰戊菊酯代謝物，FA)為模型，利用賴氨酸樹狀分子連線多個半抗原的方法，通過固相合成設計製備了針對二者的單/雙簇樹狀抗原，通過動物免疫、雜交瘤技術、沉澱與親和分離、免疫分析等過程，獲得了天然雙特異免疫抗體，並對其進行鑑定和特性分析，主要結果如下:(1)成功合成了PA和FA雙蔟非樹狀/樹狀半抗原及其抗原；(2)水溶性良好的PA單簇0代樹狀抗原可有效改善特異性免疫應答效果(0-代樹狀抗原特異性抗體的效價72000顯著高於其非樹狀抗原特異性抗體效價64000)；水溶性較差的FA樹狀抗原，因不能單分散在動物機體內有效接觸細胞表面受體而難以獲得較好的特異性免疫應答(效價小於1000)；(3)非樹狀雙簇抗原FA-BSA-PA，免疫獲得的抗體只能對PA這一種藥物有識別，不能有效產生同時識別FA和PA的雙特異性免疫應答；(4)樹狀抗原FA-Lys(PA)-BSA，免疫動物後成功獲得了能同時識別FA和PA的高效價雙特異性抗體(對FA和PA的IC50分別為209.95 ng/mL和42.45 ng/mL，線性範圍分別為18.29-1079.10 ng/mL和7.02-563.01 ng/mL)；(5)上述結果表明:①基於賴氨酸的樹狀抗原在解決了良好水溶性或機體內單分散性條件下，可有效改善動物機體的特異性免疫應答效果，增強抗體特異性識別親和力(效價)；②樹狀多簇抗原的決定簇被樹狀分子賴氨酸錨定於蛋白表面的比鄰位置，兩個決定簇能很好的產生比鄰協同刺激細胞表面受體作用，從而產生具有雙識別作用的高親和力(效價)天然免疫雙特異性抗體，其親和力常數分別為Ka(PA)=8.576×10^8 L/mol，Ka(FA)=2.527×10^8 L/mol。本研究結果為製備天然免疫雙特異性乃至多特異性抗體提供了新的思路。
