《轉錄因子Goosecoid誘導乳腺癌轉移的分子機制研究》是依託北京大學，由馮仁青擔任負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：轉錄因子Goosecoid誘導乳腺癌轉移的分子機制研究
- 項目負責人：馮仁青
- 依託單位：北京大學
- 項目類別：面上項目
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
腫瘤轉移是惡性腫瘤患者死亡的首要因素，但轉移機制還不清楚。EMT是上皮細胞來源的腫瘤細胞獲得遷移侵襲性的一個關鍵過程。我們前期研究證明抑制Src激酶活性，能抑制乳腺癌細胞的EMT，抑制細胞遷移，逆轉高轉移性乳腺癌細胞表型。可逆的EMT/MET的轉錄調控在癌轉移中起重要作用。轉錄因子Goosecoid是重要的EMT調節因子並參與乳腺癌轉移過程，Goosecoid有多個DNA結合位點，本項目創新性地利用Chip-exo技術和深度測序技術檢測Goosecoid及其突變體與DNA結合的序列特異性，分析相應的功能。利用蛋白質組學和生物信息學方法鑑定Goosecoid的相互作用蛋白，分析Goosecoid及其相互作用蛋白的功能，研究相應的信號通路。用體外培養的乳腺癌細胞和裸鼠體內成瘤實驗研究Goosecoid信號通路誘導EMT發生的分子機制，研究結果將為惡性腫瘤轉移的預防和靶向治療提供新靶點。
結題摘要
上皮-間質轉化(Epithelial-mesenchymal transition, EMT) 的重要特徵表現在細胞形態改變，上皮和間質細胞標記表達改變並使細胞獲得運動和遷移能力。EMT使癌細胞獲得運動和遷移能力涉及癌細胞從原發部位向周圍播散，在癌轉移過程中發揮重要作用。為研究Goosecoid 在乳腺癌EMT調節中的分子機制，我們用Dual luciferase assay (Promega)證明Goosecoid抑制上皮細胞標記基因CDH1啟動子活性。用TGF-beta 處理MCF-7細胞後誘導 Goosecoid表達，抑制E-cadherin 表達。構建了pcDNA3.1-GSC-Flag 表達載體，用anti-Flag antibody親和純化Goosecoid蛋白複合物，用SDS-PAGE分離和質譜鑑定了與Goosecoid相互作用蛋白，用Co-IP 和FRET 對Goosecoid和ENO1蛋白的相互作用進行了驗證，包裝了帶有eGFP標籤的慢病毒， 建立穩定表達Goosecoid 和ENO1 的MCF-7 細胞系，進一步分析Goosecoid 和ENO1 在乳腺癌細胞上皮細胞標記和間質細胞標記的表達、增殖、細胞周期，侵襲、遷移及在裸鼠體內成瘤及轉移的影響。我們的實驗結果證明Goosecoid參與TGF-beta 信號轉導通路誘導乳腺癌細胞EMT，但其上下游調節機制有待進一步研究。部分實驗結果在2013年SCBA國際會議上交流，部分結果發表在2013年的ABBS上，並對基金資助進行了標註。
