《豬孤雌發育中印跡基因H19/IGF2表達和甲基化模式的分析》是依託吉林大學，由王東旭擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：豬孤雌發育中印跡基因H19/IGF2表達和甲基化模式的分析
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：王東旭
- 依託單位：吉林大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
孤雌生殖是指不需要精子，僅靠卵子自身就可以發育成為個體。印跡基因H19/IGF2對於孤雌發育具有重要的調控作用。課題組之前的結果證明孤雌胎兒發育失敗與印跡基因異常表達和甲基化模式有關。本項目採用睪丸酮等小分子藥物對孤雌細胞進行了處理，前期結果證明其可以改變H19的表達以及甲基化狀態。同時檢測甲基轉移酶DNMTs和組蛋白乙醯化對H19/IGF2表達的影響。擬採用CRISPR/Cas9系統對H19的DMR區域進行了靶向敲除，抑制H19在孤雌細胞中的表達，探索其調控機制。通過體細胞核移植技術和胚胎移植技術，將小分子藥物處理後的孤雌體細胞核供體和CRISPR/Cas9介導的重組胚胎分別移植入代孕母豬體內，驗證印跡基因H19/IGF2的表達和甲基化狀態的改變是否可以延長孤雌發育。本研究將明確印跡基因H19/IGF2的表達和甲基化狀態在豬孤雌發育中的作用，為構建發育到期的孤雌豬提供理論依據。
結題摘要
孤雌生殖是指不需要精子，僅靠卵子自身就可以發育成為個體。印跡基因H19/IGF2對於孤雌發育具有重要的調控作用。本課題在孤雌細胞中分析印跡基因H19/IGF2的表達和甲基化模式，結果顯示，H19/IGF2存在異常的表達和甲基化狀態。進一步驗證印跡基因NNAT，NAP1L5和MKRN3在孤雌胎兒中的表達和甲基化模式，結果顯示，這些印跡基因存在紊亂的表達和甲基化模式。本課題還利用孤雌胎兒胎盤，分析了FLT1的甲基化模式。結果顯示，孤雌胎兒胎盤發育失敗與FLT1甲基化狀態異常有關。採用維生素C（Vc）和二甲基乙二醯氨基乙酸（DMOG）對孤雌胚胎進行了處理，結果顯示，Vc提高了小鼠孤雌囊胚率；而DMOG抑制了小鼠孤雌囊胚率。而且，驗證了DNA甲基化關鍵酶TETs蛋白在孤雌胚胎髮育過程中的表達模式。同時，本課題分析了N6-腺苷酸甲基化（m6A）在孤雌胚胎髮育過程中的表達水平。結果顯示，孤雌胚胎髮育中存在異常的m6A修飾。本課題通過分析孤雌發育過程中印跡基因的表達和甲基化模式，確認了其在孤雌發育過程中的重要作用，為構建發育到期的孤雌豬提供理論依據。
