《調節ZEB1-EMT-MET-miR200c反饋環靶向治療黑色素瘤CD44+CD133+CD24+CSC》是依託東南大學，由竇駿擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：調節ZEB1-EMT-MET-miR200c反饋環靶向治療黑色素瘤CD44+CD133+CD24+CSC
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：竇駿
- 依託單位：東南大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
腫瘤中有自我更新和分化的CSC，其是腫瘤拮抗化療放療、易復發與轉移的主要原因。從乳腺癌、胰腺癌、黑色素瘤等上皮來源具有高度轉移的腫瘤研究發現，它們存有ZEB1-EMT-MET-miR200c反饋環，對CSC復發與轉移起重要調節作用。本研究以我們已鑑定的鼠黑色素瘤B16F10細胞CD44+CD133+CD24+CSC為研究對象，將具有調節細胞增殖、凋亡及幹細胞分化等功能的miR-200c和能減低ZEB1表達的shZEB1轉染CSC，靶向調節ZEB1-EMT-MET-miR-200c反饋環，抑制CSC的EMT，促其MET，逆轉CSC侵襲轉移特性。從成球實驗、EMT與MET相關蛋白檢測和小鼠致瘤性等實驗，分析調節該反饋環靶向治療黑色素瘤CSC效應。本研究有望為靶向治療黑色素瘤CSC的突破提供新方法，並為靶向治療其它上皮來源的轉移性CSC，提供可借鑑的策略，研究有重大理論意義及潛在的臨床套用價值。
結題摘要
腫瘤中有自我更新和分化的CSCs，其是腫瘤拮抗化療放療、易復發與轉移的主要原因。對CSCs靶向治療，是根治腫瘤、減少化療放療毒副反應的有效途徑。我們先前研究發現，黑色素瘤CSCs存有ZEB1-EMT-MET-miR200c反饋環，對CSCs復發與轉移起重要調節作用。三年來的研究，以我們已鑑定的鼠黑色素瘤B16F10細胞的CD44+CD133+CD24+CSCs為研究對象，採用在B16F10細胞和B16F10CD44+CD133+CD24+CSCs中過表達miR200c和下調ZEB1的策略，通過一系列實驗，包括劃痕實驗、侵襲實驗檢、平板克隆形成實驗、體外增殖實驗、耐藥實驗和致瘤實驗進行本項目研究，具體研究概況見下： 方法： 1. 將構建的核心質粒與包裝質粒psPAX2 和包膜質粒pMD2.G,通過脂質體共轉染人胚腎HEK-293T細胞，並通過回收上清、超高速離心收集病毒並感染B16F10細胞，最後用極限稀釋法篩選出穩定表達miR-200c細胞株；同時以pSUPER-EGFP1為載體，構建靶向鼠ZEB1的三組shRNA真核表達質粒和一組不靶向鼠任何基因的shRNA。構建4個真核重組表達載體分別命名為ZEB1-shRNA1、ZEB1-shRNA2、ZEB1-shRNA3和scramble-shRNA。 2. 用免疫磁選技術分離獲取B16F10細胞以及B16F10-miR-200c細胞和B16F10-ZEB1- shRNA2中CD44+CD133+CSC。用qRT-PCR法和Western Blotting檢測B16F10 細胞以及B16F10 CD44+ CD133+CSCs-miR-200c及non-CSCs中的miR-200c和ZEB1的表達。 3. 分別從細胞增殖活性、體外克隆形成能力和侵襲性及體內致瘤性等方面綜合分析B16F10 CD44+CD133+CSCs中miR-200c過表達和下調ZEB1後對其生物學特性的影響。 結果： 1. 用免疫磁選技術分離獲取B16F10細胞中CD44+CD133+CSCs，經qRT-PCR法和Western Blotting檢測，結果顯示B16F10 CD44+CD133+CSCs中的miR-200c與野生型B16F10細胞及non-CSCs相比，均顯示miR-200c低表達和ZEB1高表達，差異均有顯著性意義。
