《調控RB信號通路激活耳蝸毛細胞再生》是依託復旦大學，由李華偉擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：調控RB信號通路激活耳蝸毛細胞再生
- 依託單位：復旦大學
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：李華偉
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
耳蝸毛細胞損傷後不具有自發再生能力，一旦損傷將造成永久性聽力障礙，激活毛細胞再生是理想的治療感音神經性耳聾途徑。RB基因是控制內耳前體細胞處於靜止狀態和毛細胞存活的關鍵基因，完全敲除RB基因，可以激活毛細胞再生，但再生的毛細胞迅速發生凋亡。理想的方法是短暫下調RB基因激活耳蝸毛細胞再生，並維持RB在新生毛細胞中表達以維持其存活，修復損傷的耳蝸感覺上皮，達到聽覺功能修復。已知raf-1基因與RB基因結合可以抑制pRB功能，過量表達raf-1可以促進pRB磷酸化，促進細胞進入細胞周期。我們預實驗結果顯示，raf-1在內耳前體細胞增殖期高度表達，毛細胞發育成熟後表達下降，本項目擬以腺病毒為載體，在受損傷的耳蝸感覺上皮過量表達raf-1基因，試圖通過raf-1過量表達抑制pRB功能，激活靜止期的支持細胞重新進入細胞周期，增殖並分化為新生的毛細胞，為基因治療感音神經性耳聾奠定實驗基礎。
結題摘要
耳蝸毛細胞損傷後不具有自發再生能力，一旦損傷將造成永久性聽力障礙，激活毛細胞再生是理想的治療感音神經性耳聾途徑。RB基因是控制內耳前體細胞處於靜止狀態和毛細胞存活的關鍵基因，完全敲除RB基因，可以激活毛細胞再生，但再生的毛細胞迅速發生凋亡。理想的方法是短暫下調RB基因激活耳蝸毛細胞再生，並維持RB在新生毛細胞中表達以維持其存活，修復損傷的耳蝸感覺上皮，達到聽覺功能修復。已知raf-1基因與RB基因結合可以抑制pRB功能，過量表達raf-1可以促進pRB磷酸化，促進細胞進入細胞周期。我們的實驗結果顯示，raf-1在內耳前體細胞增殖期高度表達，毛細胞發育成熟後表達下降。我們首先採用化學阻斷劑RRD-251和U0126調控pRB磷酸化狀態，利用斑馬魚、雞胚等模型觀察了pRB磷酸化狀態對毛細胞再生、細胞增殖和細胞凋亡的影響，結果提示抑制Rb-Raf-1信號通路降低pRB磷酸化狀態，導致斑馬魚細胞增殖和毛細胞再生降低；此外Rb-Raf-1信號通路也參與調節雞胚內耳前體細胞增殖和凋亡。我們在哺乳動物小鼠體內進一步研究發現，Shh可以下調Rb基因表達，同時使pRB蛋白表達顯著降低，同時激活細胞周期因子，揭示了Shh通過調控Rb基因從而激活毛細胞再生的理論。 同時建立了良好的成年鼠耳蝸培養體系及病毒轉染模型，使體外成年鼠毛細胞再生藥物的篩查及基因干預成為可能。本項目總計發表標註本項目資助的論文9篇，圓滿完成了任務。
