基本介紹
解離液
⑴1 mol/L鹽酸配方:濃鹽酸15%(比重1.19)82.5 ml,用蒸餾水定容 1000 ml.
⑵0.2 mol/L鹽酸配方:濃鹽酸15%(比重1.19)16.5 ml,用蒸餾水定容 1000 ml
鹽酸水解時間對染色效果影響很大,水解時間短,易著色但較難壓片;水解時間長,染色慢而色淡;超過20min或水解溫度過高,往往染色極淡,或染不上色.各種材料最合適的時間有差別,一般來說,大染色體材料水解時間可較長,小染色體材料宜短.
改用0.2 mol/L鹽酸於60℃恆溫下水解10~15min,對各種類型材料都能獲得細胞分離和染色合適的較好效果.
解離就是用要藥液使組織的細胞相互分離開來,便於最後製片時能被壓成一薄層進行顯微觀察。解離液中酒精的作用是迅速殺死細胞,固定細胞的分裂相(將洋蔥根尖剪下後,如果不立即投入固定液中將其殺死並令其各種細胞結構凝固,那么,整個根尖將一個分裂期細胞也找不到!);而鹽酸能溶解果膠,從而使洋蔥細胞的細胞壁軟化,並使細胞間的中膠層物質溶解,從而達到分離細胞的目的。另外解離時間不宜過短,否則根尖未充分解離,壓片時細胞分不開;但又不能太長,否則使根尖過分酥軟,無法進行漂洗和染色,且染色體成分被破壞。這一步是實驗成功與否的關鍵
3、漂洗的目的是去除根中多餘的解離液,特別是鹽酸,防止解離過度,破壞染色體結構。(註:不是因為染色時用的是鹼性染料龍膽紫,酸與鹼發生反應會影響染色效果,龍膽紫溶液呈酸性,而鹼性染料是根據染料物質中助色基團電離後所帶的電荷來決定。一般來說,助色基團帶正電荷的染色劑為鹼性染色劑,反之則為酸性染色劑。)
但觀察動物細胞有絲分裂中,不能用鹽酸和酒精來“解離”動物組織。動物細胞不分散的原因是細胞膜上的某些蛋白質分子嵌入到相鄰細胞的細胞膜內,有的還形成凹凸式鑲嵌結構。鹽酸和酒精都不能破壞這兩種結構,因此無法用鹽酸和酒精來“解離”動物組織。只能用胰蛋白酶,對於植物細胞,胰蛋白酶也沒法發揮作用。