基本介紹
- 中文名：親和色譜
- 國家：俄國
- 也稱為：親和層析
- 提出人：茨維特
色譜概述,原理,一般流程,特殊套用,影響因素,
色譜概述
20世紀初，俄國植物學家茨維特（Tswett）首次提出色譜法。他把碳酸鈣粉末裝到玻璃管中，將植物葉子的石油醚萃取液作為樣品倒入管內，然後再用石油醚自上而下洗脫。隨著洗脫的進行，植物葉子中的各種色素向下移動逐漸形成一圈圈的色帶，茨維特將這種色帶分離過程稱為色譜（Chromatography），所用的玻璃管內的碳酸鈣填充物稱為固定相（stationary phase）,洗脫用的石油醚稱為洗脫液或洗脫劑（eluent），也就是我們常說的流動相(mobile phase)。後來，採用該法分離了許許多多的物質，雖然分離過程中看不到色帶存在，但色譜法一直沿用至今。
色譜法在當今物質尤其是具有生物活性物質的分離中起到舉足輕重的作用。然而在色譜發展的早期有許多的人往往將色譜看做一種藝術（art）, 但是隨著色譜理論的發展，以及色譜技術的不斷推廣，色譜逐漸的稱為了一種科學（science）。對於從事生物大分子分離的物質常常用一句話來形容色譜的重要作用：“色譜技術是當今生物工程下游技術的核心”。當今的色譜法包括分離和檢查兩部分，能夠同時實現分離和分析。色譜法也必定會隨著材料、生物等多學科研究的深入會更加廣泛的套用到分離科學和分析化學之中的。
原理
將一對能可逆結合和解離生物分子的一方作為配基（也稱為配體），與具有大孔徑、親水性的固相載體相偶聯、製成專一的親和吸附劑，再用此親和吸附劑填充色譜柱，當含有被分離物質的混合物隨著流動相流經色譜柱時，親和吸附劑上的配基就有選擇地吸附能與其結合的物質，而其他的蛋白質及雜質不被吸附，從色譜柱中流出，使用適當的緩衝液使被分離物質與配基解吸附，即可獲得純化的目的產物。
一般流程
親和色譜分離的通常是混合在溶液中的物質，比如細胞內容物、培養基或血漿等。待分離的分子在通過色譜柱時被固定相或介質上的基團捕獲，而溶液中其他的物質可以順利通過色譜柱。然後把固態的基質取出後洗脫，目標分子即刻被洗脫下來。如果分離的目的是去除溶液中某種分子，那么只要分子能與介質結合即可，可以不必進行洗脫，再生時調整流動相將雜質洗脫。
特殊套用
親和色譜的用途很廣泛，可以用來從細胞提取物中分離純化核酸、蛋白，還可以從血漿中分離抗體。分離重組蛋白就經常使用親和色譜。通過基因修飾為蛋白加上一些人為的特性，這些特性使蛋白選擇性地與配體結合，從而達到分離的目的。親和色譜的另一大用途是從血漿中分離抗體。
影響因素
1、上樣體積
若目標產物與配基的結合作用較強，上樣體積對親和色譜效果影響較小。若二者間結合力較弱，樣品濃度要高一些，上樣量不要超過色譜柱載量的5%~10%。（這個載量是指色譜柱所吸附的配體的量）
2、柱長
親和柱的長度需要根據親和介質的性質確定。如果親和介質的載量高，與目標產物（目標物）的作用力強，可以選擇較短的珠子（柱子）；相反，則應該增加柱子的長度，保證目標產物與親和介質有充分的作用時間。
