建立高效表達土撥鼠肝炎病毒核心蛋白（WHcAg）的方法並對其B細胞表位進行鑑定。
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簡介
流行性乙型腦炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)是一種嚴重危害人畜健康的蟲媒病毒.表面囊膜蛋白(E蛋白)是該病毒的主要結構蛋白.E蛋白在介導病毒與宿主細胞的吸附、融合,決定病毒的血凝活性、細胞嗜性以及決定病毒毒力和誘導宿主產生保護性免疫反應中起重要作用.E蛋白結構域Ⅲ(EⅢ)是誘導中和抗體的重要區域.為確定乙型腦炎EⅢ的抗原表位,實驗首先克隆了JEV疫苗株SA14-14-2的EⅢ區域,並用pGEX-6P-1載體進行融合表達,免疫印跡分析表明,該融合蛋白能被抗JEV血清識別.為了進一步對該結構域進行抗原表位作圖,設計了14個覆蓋該區域且部分重疊的短肽.將各短肽與GST進行融合表達與純化.短肽融合蛋白經JEV陽性血清免疫印跡和ELISA免疫反應性掃描分析,結果鑑定出,E39(305TEKFSFAKNPVDTGHG320)、E45-1(355VTVNPFVATSSA366)、E48-1(377PFGDSYIV384)和E49(385VGRGDKQINHHWHKAG400)4個線性抗原表位.分別將4個抗原表位融合蛋白免疫小鼠,製備各抗原表位單因子血清,結果經體外病毒中和試驗表明,E39為具有病毒中和活性的抗原表位.試驗結果為進一步分析JEVE蛋白結構與功能以及診斷試劑和表位疫苗的研究提供了重要工作基礎.
相關介紹
土撥鼠肝炎病毒核心蛋白的高效表達和B細胞表位鑑定
摘 要:目的 方法分別構建不同截短型WHcAg的質粒以了解能大量表達並形成WHV核心顆粒的區段，利用變性WHcAg製備單克隆抗體以尋找能與WHcAg線性B細胞表位結合的單克隆抗體。結果 WHcAg前144或149胺基酸殘基能夠大量表達並能形成顆粒樣結構。這2種截短型WHcAg能夠在大腸桿菌中表達並組裝成直徑為34腫的核心顆粒，最終純化獲得毫克級的核心蛋白。截短型WHcAg保留了全長WHcAg的抗原性，而且變性WHcAg存在另外的B細胞線性表位，利用變性WHcAg進行免疫製備單克隆抗體獲得的5株抗體均針對WHcAg的N末端表位，該表位在WHcAg和HBcAg高度保守。結論 建立了高效表達WHcAg的方法，製備了針對WncAg單克隆抗體。並對WHcAg的線性B細胞表位進行了鑑定，發現WHcAg和HBcAg的N末端存在共同的線性B細胞表位。
