血源B型肝炎疫苗

血源B型肝炎疫苗是針對B肝的一種疫苗。

血源B型肝炎疫苗製造及檢定規程

血源

1.1 對獻血員的要求

1.1.1 獻血員應為20～50歲無症狀HBsAg攜帶者，其肝功能應無顯著異常，並穩定。對獻血員的其他要求按《原料血漿採集（單採血漿術）規程》執行。

1.1.2個月接種過活疫苗，1年內接種過狂犬病疫苗者，均不採血。

1.1.3 必要時以免疫擴散法（ID）測定HBsAg亞型。血源應以ad亞型為主，可有少量ay亞型。

1.2 單份血漿檢查

1.2.1 無菌試驗

按《生物製品無菌試驗規程》進行。

1.2.2HbsAg測定

用對流電泳法測定，HBsAg滴度應≥1∶8，或用反向血凝法（RPHA）測定，滴度應≥1∶1024。

1.3 混合血漿檢查

1.3.1支原體檢查

按《生物製品無菌試驗規程》進行。

1.3.2 取樣接種孔雀綠培養基，35～37℃培養28天，結果應為陰性。

1.3.3 外源病毒檢查

用Vero細胞和人二倍體細胞各3瓶，每瓶容量為10～15ml，各接種0.2ml樣品，35～37℃培養10天，應無病變出現。用0.2%～0.5%雞與豚鼠紅細胞等量混合後於37℃吸附1小時，測定血吸附反應，應均為陰性。

抗原的濃縮和變化

2.1 血漿脫纖維

於血漿中加入氯化鈣溶液，使之脫纖維。

2.2硫酸銨沉澱

於血清中加入硫酸銨飽和溶液，或用固體硫酸銨，使最後達到適宜的飽和度，沉澱HBsA.

2.3 超離心純化

溴化鉀等密度區帶離心2～3次，每次離心後分部收樣，根據紫外監測峰及密度測定，合併合格的樣品，經超濾去鹽濃縮。蔗糖速率區帶離心1～2次，分離出HBsAg。

滅活

3.1 胃酶處理

將HBsAg懸液加入適量胃酶，置35～37℃處理4～5小時，最後超濾去胃酶。

3.2 尿素處理

於HBsAg懸液中加尿素至4～8mol/L置37℃處理4～5小時，超濾去尿素。亦可不用尿素處理。

3.3福馬林滅活

於HBsAg懸液中按1∶4000加入福馬林，置37℃72～96小時。不用尿素處理者可用1∶2000福馬林滅活。

稀釋與吸附

已滅活的疫苗原液經除菌過濾後，根據Lowry法檢測折算的特異性蛋白含量進行稀釋，加入A1（OH）3吸附，並於疫苗內加入防腐劑。

半成品檢定

5.1 總蛋白含量測定

用Lowry法測定，使用檢定所提供的標準品。

5.2HBsAg含量測定

按總蛋白含量將樣品稀釋至不同稀釋度，用RIA或火箭電泳法測定，使用檢定所提供的標準品，HBsAg含量應在90%以上。

5.3 電鏡檢查

取每台離心機每次蔗糖離心後的樣品，製作5個銅網，在60000倍電鏡下，每個銅網觀察6個視野，結果應主要為22nm球形顆粒，未見Dane顆粒為合格。有可疑Dane顆粒者應以加倍視野數檢查。

5.4 殘留雜蛋白檢查

5.4.1 聚丙烯醯胺凝膠電泳法

濃縮膠濃度為4%，分離膠為7.5%，加10μgHBsAg樣品和適量的人血清白蛋白進行電泳，銀染，試驗樣品應不出現明顯雜蛋白帶。

5.4.2SDS聚丙烯醯胺凝膠電泳法

HBsAg樣品經SDS處理後在7.0%濃縮膠和15%分離膠中加入5μg進行電泳，結果在分離膠中應主要存在22000及28000分子量帶，應不出現明顯的雜蛋白帶。

5.5HBV DNA檢查

用HBv DNA片段製備探針，取200μg除菌後的樣品與探針進行雜交，結果應為陰性。控針的靈敏度應≤1pg。

5.6 無菌試驗

按《生物製品無菌試驗規程》進行。

分裝

每支安瓿分裝1.0ml，HBsAg含量分別為10μg和30μg兩種規程。

成品檢定

7.1 無菌試驗

按《生物製品無菌試驗規程》進行。

7.2 安全試驗

每亞批疫苗皮下注射體重14～16g小白鼠，每隻0.5ml，注射後第3天和第7天各觀察一次，允許皮下有硬結，但應健存。

7.3 化學檢定

按《生物製品化學規定規程》進行。

7.3.1pH值測定

應為5.5～6.8。

7.3.2 游離甲醛測定

應含游離甲醛，但含量應≤0.01%。

7.3.3 氫氧化鋁含量測定

每ml應不超過1.25mg。

7.3.4 氯化鈉含量測定

應為0.8～0.95%。

7.3.5硫柳汞含量測定

不應超過0.01%。

7.4 效力和鑑別試驗

將疫苗4倍遞增稀釋，每個稀釋度接種BALB/cH2d或NIHq型雌性小白鼠20隻，每隻腹腔注射1.0ml，4～6周后採血，以RIA法測定抗-HBs，計算小白鼠ED50值與參比苗ED50值，結果以檢品ED50值/參比ED50值，其比值≥1為合格。

7.5 抗-HBc檢測

每批用6隻體重為300～350g同性豚鼠，每隻腹部皮下注射疫苗0.5ml，間隔一個月免疫第2次，之後一個月心臟採血，用RIA法檢測免疫前後血清，結果抗-HBc應陰性，否則應重試。

7.6人體免疫觀察及標準

每年度生產的頭3批疫苗或前、中、後各一批疫苗進行人體免疫觀察，觀察對象為小學生或學齡前兒童，按0、1、2個月程式每批至少接種20人，每人於上臂三角肌肌內注射1.0ml，於3針接種後一個月採血，用RIA法測定三項指標，抗-HBs陽性率（S/N≥10）大於90%，6個月內未出現HBsAg者判為合格，否則需要重試。對免疫後單獨出現高滴度抗-HBc者應分析原因。

保存與效期

保存於2～8℃暗處，不得凍結。自檢定合格之日起效期為2年。

血源B型肝炎疫苗使用說明書

本品系由無症狀HBsAg攜帶者血漿提取的HBsAg，經純化、滅活及加佐劑吸附後製成。

接種對象

B型肝炎易感者（表面抗原陰性，轉氨酶正常）。主要用於嬰幼兒。

用法

1.上臂三角肌肌內注射。

2.免疫程式均按0、1、6個月各注射一針。新生兒接種時，0系指第一針免疫，免疫應於出生後24小時內完成，然後間隔1個月及6個月再各注射一針。

3.孕婦不進行B肝感染指標檢測時，所有新生兒均注射30μg、10μg、10μg/支疫苗3針。

4.孕婦進行B肝感染指標檢測時，B肝表面抗原（特別是e抗原）陽性母親的新生兒，注射30μg/支疫苗3針。與抗B型肝炎免疫球蛋白（HBIG）聯合使用，效果更佳。0時先注射HBIG一針，2～4周后開始注射疫苗。B肝表面抗原陰性母親的新生兒，注射30μg、10μg、10μg/支疫苗3針。

5.其他高成人群，如腎透析，以及其他職業性B肝密切接觸者，注射30μg/支疫苗3針。

6.一般易感者（包括嬰幼兒、兒童及成人）注射10μg/支疫苗3針。

禁忌

患有肝炎、發熱、急性或慢性嚴重疾病，或有過敏史者。

注意事項

1.本疫苗在注射前要充分搖勻。

2.如安瓿破裂，疫苗變質有搖不散的塊狀物不得使用。

裝量

本疫苗分為10μg/支及30μg/支兩種規格。

保存

保存於2～8℃暗處，嚴防凍結。