血清麝香草酚濁度試驗，是測定血漿蛋白的水平和分析其成分，是肝臟疾病重要試驗之一。
基本介紹
- 中文名：血清麝香草酚濁度試驗
- 化驗取材：血液
概述,分類,化驗取材,化驗方法,原理,試劑,操作方法,正常值,臨床意義,相關疾病,
概述
各種血清膠體穩定性試驗的原理基本相同，但所用的試劑不同，促進和抑制絮濁的作用有差異，目前臨床常用的有血清麝香草酚濁度試驗（TTT）。
分類
血液生化檢查 > 蛋白質測定
化驗取材
血液
化驗方法
肝功能檢查
原理
肝臟疾病時，血清蛋白的質與量有所改變，當血清和麝香草酚巴比妥液試劑作用時，麝香草酚可減低血清內脂類物質的分散力，而血清經低離子強度的巴比妥緩衝液稀釋後，球蛋白的部分溶解度降低而產生沉澱，這種沉澱是球蛋白、脂類和麝香草酚複合體，使溶液變濁，其渾濁程度與沉澱的多少與肝病的嚴重程度有一定的關係。
試劑
麝香草酚緩衝液配製有兩種常用方法：
（1）麝香草酚-巴比妥緩衝液（pH7.55±0.05）精確稱取巴比妥3.09g、巴比妥鈉1.69g及麝香草酚6g，倒入經煮沸除去二氧化碳的1000ml熱蒸餾水中，繼續加熱使溶解。室溫靜置過夜，若顯混濁，可加麝香草酚細末少許。並激烈振盪使結晶析出，過濾後得透明溶液。此液pH7.55±0.05，裝瓶內塞緊貯室溫備用。若發現混濁丟棄不用。
（2）麝香草酚-Tris-HCl緩衝液的配製：
①0.5mol/L三羥甲基氨基甲烷（Tris）緩衝液（pH7.7）：稱取Tris60.6g，加約800ml蒸餾水溶解，用10mol/L HCl（約加35ml）調節至pH7.7。
②100g/L麝香草酚乙醇溶液：重結晶麝香草酚10g，溶於95%乙醇中，並加乙醇至100ml。塞緊置冷處貯存。
③麝香草酚-Tris-HCl緩衝液：取蒸餾水約800ml，加熱至40～50℃，加入0.5mol/L Tris-HCl緩衝液20ml，邊搖邊加入100g/L麝香草酚乙醇溶液10ml，最後加水至1000ml，充分混勻。室溫中可至少保存3個月。
操作方法
取與標準比濁管口徑相同的試管，加入新鮮血清0.05ml，再加入麝香草酚巴比妥緩衝液3ml，混合，室溫靜置30min，再顛倒混合數次。目視比濁時，可背朝光，比濁管下襯有字白紙，辨認字跡清晰程度來判定濁度單位。與測定管濁度相同的標準比濁管的單位數，即為測定血清的單位數。如用分光光度計比濁時，以麝香草酚巴比妥緩衝液校正“0”點，波長650nm，讀取測定管的吸光度，查標準曲線求出濁度單位。
附註:
TTT是一個很簡單的試驗，但各試驗室間出入往往不小。造成此差異因素很多；首先是雖然同稱為TTT試驗，但各個實驗室在試劑配製，標準曲線繪製或標準管配製方法上並不相同。
（1）國內所報告的TTT單位為Shank（襄克）單位。1944年Maclagen（麥克萊根）首先建立TTT試驗，當時以Kingsley（金斯萊）尿蛋白比濁管表示TTT濁度單位（相當於10mg/dl尿蛋白溶液加磺柳酸所顯示的濁度為一個Maclagan單位）。後來，Shank和Hoagland改用BaSO4懸液作為濁度標準，由0.0962mol/L BaCl2加H2SO4所產生的濁度相當於Maclagan所套用的Kingsley標準。但在發表文章時，誤印為0.0962N BaCl2，因此測定結果為麥氏單位的二倍（1個麥氏單位=2個Shank單位）。
（2）血清要新鮮，應早晨空腹抽血。用分光光度計比濁法測定麝濁時，如血內脂質較多，可用生理鹽水6ml代替緩衝液稀釋血清，作空白管。
（3）麝香草酚-巴比妥緩衝液的pH應在7.50～7.60。pH增高，敏感度降低，可出現假陰性；pH降低，敏感度升高，可出現假陽性。
（4）為了簡化手續，不少實驗室用100g/L麝香草酚乙醇溶液，直接加入巴比妥緩衝液中，省去結晶和過濾步驟，但此配方較原法多含1%乙醇，試驗結果表明比原配方的濁度偏離約20%，絮狀試驗陽性率反而降低。
（5）麝香草酚濁度試驗結果隨溫度的改變而有所變化。一般是溫度高，濁度低；溫度低，濁度高。為了克服這一誤差，可以從表1上將不同溫度下的濁度結果換算成25℃的結果以便於比較。
使用說明：以6u一行為例，在10℃時測定的6u，實際上在25℃時為4.7u。在30℃時測定的6u，在25℃時為7.2u。余類推。
（6）配製硫酸鋇標準比濁管時注意以下幾點：①硫酸試劑的濃度硫酸在反應中雖然是過量的，但當濃度小於0.1mol/L，形成的硫酸鋇濁度低；濃度大於0.1mol/L濁度增高。因此，硫酸試劑須嚴格校正至0.1mol/L。②反應溫度：10℃時形成的硫酸鋇顆粒細，濁度較高，結果重複性好。25℃、30℃、37℃時形成的顆粒較粗，濁度較低，重複性不易控制。③操作手法：混和方法不同，形成的硫酸鋇顆粒大小不同，結果相差很大。所以，每次按規定操作可提高精密度。
（7）麝香草酚緩衝液易變質，但如保存於冰櫃中，可因結晶逐漸析出而降低敏感度，故平時使用時，仍應置室溫中，如顯混濁，即不能用。
（8）麝香草酚應為潔白晶體，如帶黃色，須重結晶處理。可按下法重結晶精製：取麝香草酚100g，溶於100ml 95%乙醇中，以吸濾漏斗過濾。濾液中加入於100ml冷蒸餾水，混勻。靜置20min後吸濾，用冷蒸餾水洗結晶兩次，可得到潔白的結晶，置乾燥器內待完全乾燥後使用。
（9）用巴比妥配製的試劑不能久置，超過2周后，TTT結果有增高趨勢，一個月後明顯偏高。一般認為此試劑不穩定與巴比妥有關，因為久置後，巴比妥試劑的紅外線吸收曲線已有明顯變化。本文所介紹麝香草酚-Tris-HCl緩衝液，具有穩定性高，所配TTT試劑放室溫至少可保存3個月，且濁度結果受室溫變化的影響小。
（10）光電比濁法與光電比色法有所不同，比濁法混濁液除了吸收一部分入射光以外，懸浮的顆粒還能使一部分入射光反射和折射，因此光電池所感受的光除了經過吸收以後的出射光外，還有折射的光，後者不是平行光束，混和液和光電池之間距離越大，則折射光的影響越小。所以在採用72型分光光度計比濁時，比色杯的位置應放在比色杯座的遠光電池的一邊，可以提高準確度。
（11）麝香草酚緩衝液中麝香草酚含量是影響結果的重要因素之一。濁度單位高低和麝香草酚含量成正比，要求使用25℃的麝香草酚飽和溶液。
緩衝液中麝香草酚含量測定法：麝香草酚標準液（1ml含0.1mg）：準確稱取試劑規格麝香草酚100mg，加水溶解後加水至1L。
取待測麝香草酚緩衝液1ml，用水稀釋至10ml，以後按表2進行測定。
混勻37℃水浴放置15min，750nm比色，以空白管校正吸光度至零，讀取各管吸光度，按下式計算：
正常值
0～6u
臨床意義
各類血清膠體穩定性試驗在不同的肝病或同一疾病的不同時期，其陽性率可有差異，各有其一定臨床意義。
（1）急性肝炎的診斷：在急性肝炎和急性肝損害時，各類血清絮狀、濁度試驗均可出現陽性，總陽性率約80%～90%。TTT於發病一周開始升高，二周時達高峰，以後逐漸降至正常。這些改變可在黃疸前期即出現，故對急性肝炎有早期診斷意義，但不如轉氨酶敏感，陽性率也比轉氨酶低。出現陽性時期較轉氨酶為遲，這是因為蛋白質的更新須有一定時間，如白蛋白的半壽期10～36天，因此肝臟疾病引起的蛋白質的變化常需一定時間才能表現出來。在無黃疸型肝炎病例，血清膠體穩定性試驗常可作為診斷的敏感指標。如急性肝炎絮濁試驗持續陽性，提示肝病有轉入慢性化的趨勢。
（2）肝炎與肝硬化病情的判斷：在急性肝炎時，TTT的變化和血清脂質升降相平行，但隨著病變的遷延化、慢性化、則與血清γ球蛋白呈正相關，故TTT持續陽性是肝病遷延化、慢性化的反映。
（3）阻塞性黃疸與肝炎的鑑別：當阻塞性黃疸患者尚無肝細胞損害時，各類血清絮濁試驗多屬陰性，與急性肝實質損害時不同，對於鑑別黃疸類型有一定價值。但在長期阻塞性黃疸或合併感染的病人，肝實質亦常有損害，此試驗亦能呈陽性，但一般見於病程中、後期。在長期黃疸病例，如血清絮濁試驗持續陰性，應考慮先天性黃疸的可能。
（4）嚴重妊娠惡阻與妊娠合併肝炎的鑑別：妊娠惡阻時可出現中度的高膽紅素血症和轉氨酶升高，但血清絮濁試驗幾乎全都正常；相反，妊娠合併肝炎時則在90%以上病例血清絮濁試驗均呈陽性反應。
（5）脂肪肝時，TTT常升高。有人測定TTT/ZnTT比值，發現在脂肪肝時較慢性肝炎為高，認為可藉此比值變化作為兩者鑑別診斷的參考。在轉移性肝癌時，TTT值較原發性肝癌時為低，因此對肝癌病例，此試驗呈低值者宜先考慮轉移性肝癌，呈高值者優先考慮原發性肝癌，但這僅有參考價值，主要還應根據臨床。
在血吸蟲性肝硬變時，血清絮濁試驗常可陽性。
（6）肝外疾病：血清膠體穩定性試驗對肝病並不具有特異性，在其他可發生白蛋白減少、球蛋白（γ或β球蛋白）或類脂質增加的疾病如瘧疾、結締組織疾病、黑熱病、亞急性細菌性心內膜炎、多發性骨髓瘤等疾患時，亦可呈陽性反應。
相關疾病
多發性骨髓瘤 肝癌 肝硬變 肝硬化 黑熱病 黃疸 瘧疾 原發性肝癌 脂肪肝 轉移性肝癌
