《血清循環miRNA表達譜用於早期肝癌診斷和復發的研究》是依託中山大學，由汪謙擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：血清循環miRNA表達譜用於早期肝癌診斷和復發的研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：汪謙
- 依託單位：中山大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
前期，我們以篩查出31種差異miRNA為對象的主題分析可基本將肝癌組織與毗鄰癌旁組織、正常肝組織分開。此外，還證實若干miRNA與肝癌的侵潤及轉移有關。提示肝癌組織miRNA表達譜可能有望成為新的肝癌標記物用於早期肝癌診斷。但選取肝癌組織檢測技術複雜、創傷大。相對而言，外周血清容易獲得和檢測，便於臨床套用和推廣。新近研究顯示通過檢測血清中循環miRNA以診斷疾病是可行、穩定的。但目前關於肝癌演變過程中循環miRNA表達譜的研究尚未見報導。綜上，我們構想通過檢測B肝-肝硬化-肝癌（早、晚期）中血清循環miRNA表達譜，建立一個以血清循環miRNA為基礎的肝癌早期診斷、肝癌轉移的分子預測模型，同時在肝癌的發生中進一步觀察血清循環miRNA與傳統的基因蛋白事件的相關性，進一步揭示血清循環miRNA作為早期肝癌診斷和復發的內在機理。該研究將對尋找肝癌早期診斷、早期預測的分子標誌物提供新的線索與資料
結題摘要
本項目探討血清miRNA在B肝、肝硬化、B肝相關肝癌和晚期B肝相關肝癌中的表達譜差異，173種miRNA在肝癌進展中呈現差異表達，其中血清miR-145和miR-129-5p在癌組織中相對於在癌旁組織中下調錶達最明顯。 本項目進一步分析下調miR-145和miR-129-5p與B肝相關肝癌臨床病理資料間的關係，初步探討其在B肝相關肝癌發生髮展過程中的作用及其臨床意義。miR-145和miR-129-5p的表達在癌組織中比其癌旁組織明顯下調。其中miR-145在肝癌組織中的表達與肝癌腫瘤大小、腫瘤分期、惡性程度、肝內外轉移及血管侵犯有關但與患者性別、AFP均無關。其表達在腫瘤直徑小於5cm、腫瘤分期高、分化程度低、有肝內轉移及血管侵犯的腫瘤中更低。體內、外實驗研究miR-145對肝癌細胞生物學功能的影響。將人工合成的pre-miR-145基因片段，克隆入真核表達載體pIRES2-EGFP中，構建重組質粒pIRES2-EGFP-pre-miR-145質粒。分別運用CCK8、流式細胞術和TransWell小室、細胞劃痕試驗檢測過表達及去表達miR-145對肝癌細胞增殖、細胞周期和侵襲、遷移能力的影響。裸鼠皮下移植成瘤實驗，觀察過表達miR-145對腫瘤生長的影響。結果miR-145可抑制肝癌細胞的增殖、侵襲和遷移能力，但對肝癌細胞周期無明顯影響。螢光素酶報告實驗證實miR-145靶向結合在ADAM17 基因 的3′UTR 。結果表明miR-145通過靶向調節ADAM17進而抑制肝癌細胞的增殖、侵襲能力。 另外，為探討miR-129-5p對肝癌細胞侵襲轉移的影響及相關分子機制。分別轉染以及共轉染pre-miR-129-5p、anti-miR-129-5p、ETS1 siRNA後，觀察細胞遷移和侵襲功能變化；構建含ETS1 3’UTR結合位點的螢光素酶報告載體,與miR-129-5p表達載體共轉染,檢測細胞中的螢光素酶活性；檢測肝癌患者標本中miR-129-5p和ETS1的表達，結合臨床資料進行統計學分析。miR-129-5p通過直接靶向作用於ETS1來抑制肝癌細胞的侵襲轉移。本項目結果不僅揭示miR-145和miR-129-5p在肝癌中的的作用及其機制，而且將為肝癌的治療新靶點提供科學依據和理論基礎。
