血凝試驗又稱為Coombs試驗，是檢測抗紅細胞不完全抗體的一種的方法。它分為直接Coombs試驗和間接Coombs試驗，直接試驗的目的是檢查紅細胞表面的不完全抗體而間接試驗的目的是檢查血清中存在游離的不完全抗體。
基本介紹
- 中文名：血凝實驗
- 外文名：Hemagglutination test
- 建立時間：1945年
- 分類：直接Coombs試驗和間接Coombs試驗
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簡介
抗球蛋白參與的血凝試驗由Coombs於1945年建立，故又稱為Coombs試驗，是檢測抗紅細胞不完全抗體的一種很有用的方法。所謂不完全抗體，多半是7S的IgG類抗體，能與相應的抗原牢固結合，但在一般條件下不出現可見反應。Coombs利用抗球蛋白抗體作為第二抗體，連線與紅細胞表面抗原結合的特異抗體，使紅細胞凝集。經常用作試驗的有兩類方法。
直接Coombs試驗
直接Coombs試驗
將含球蛋白的試劑直接加到紅細胞表面結合抗體的細胞懸液中，即可見細胞凝集（圖13-6）。可用玻片法定性測定，也可用試管法作半定量分析。常用於新生兒溶血症、自身免疫性溶血症、特發性自身免疫性貧血和醫源性溶血性疾病等的檢測。
間接Coombs試驗
用以檢測游離的血清中的不完全抗體。將受檢血清和具有待測不完全抗體相應抗原性的紅細胞相結合。再加入抗球蛋白抗體就可出現可見的紅細胞凝集（圖13-7）。此試驗多用於檢測母體Rh（D）抗體，以便及早發現和避免新生兒溶血症的發生。亦可對紅細胞不相容的輸血所產生的血型抗體進行檢測。
間接Coombs試驗
Coombs試驗除了廣泛套用於血液病的檢測外，還可採用專一特異性的抗球蛋白的血清如IgG血清、抗IgA或抗IgM以及抗補體血清等，分析結合於紅細胞上的不完全抗體的免疫球亞類。
有些病毒具有凝集某種(些)動物紅細胞的能力，稱為病毒的血凝，利用這種特性設計的試驗稱血球凝集(HA)試驗，以此來推測被檢材料中有無病毒存在，是非特異性的，但病毒的凝集紅細胞的能力可被相應的特異性抗體所抑制，即血球凝集抑制(HI)試驗，具有特異性。通過HA-HI試驗，可用已知血清來鑑定未知病毒，也可用已知病毒來檢查被檢血清中的相應抗體和滴定抗體的含量。
試驗方法
[目的要求]
掌握病毒HA和HI試驗的原理和基本操作方法，了解其實用價值。
[材料與試劑]
1. 96孔“U”形或“V”形微量反應板，50L定量移液器，滴頭，微型振盪器。
2. 生理鹽水，0.5% 雞紅細胞懸液。
3. 新城疫病毒液（尿囊液或凍乾疫苗液），新城疫陽性血清，被檢雞血清。
[實驗內容及操作方法]
血球凝集(HA)試驗
1. 在96孔微量反應板上進行，自左至右各孔加50L生理鹽水。
2. 於左側第1孔加50L病毒液（尿囊液或凍乾疫苗液），混合均勻後，吸50L至第2孔，依次倍比稀釋至第11孔，吸棄50L；第12孔為紅細胞對照。
3. 自右至左依次向各孔加入0.5% 雞紅細胞懸液50L，在振盪器上振盪，室溫下靜置後觀察結果（表4-1）。
表 4-1 病毒血凝試驗的操作方法（單位：L）
孔 號 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
病毒稀釋度 1:2 1:4 1:8 1:16 1:32 1:64 1:128 1:256 1:512 1:1024 1:2048 對照
生理鹽水 50
50
50
50
50
50
50
50
50
50
50
50
病毒液 50
50
50
50
50
50
50
50
50
50
50
0.5%紅細胞 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50
棄50
結果觀察 ++++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++ +++ + + - -
4. 結果判定：
從靜置後10 min開始觀察結果，待對照孔紅細胞已沉澱即可進行結果觀察。紅細胞全部凝集，沉於孔底，平鋪呈網狀，即為100% 凝集（++++），不凝集者（-）紅細胞沉於孔底呈點狀。
以100% 凝集的病毒最大稀釋度為該病毒血凝價，即為一個凝集單位。從表4-1看出，該新城疫病毒液的血凝價為1:128，則l:128為1個血凝單位，1:64、l:32分別為2、4個血凝單位，或將128/4=32，即1:32稀釋的病毒液為4個血凝單位。
