蛋白質分離鑑定法是把蛋白質從生物組織中分離出來加以提純和鑑定的方法。其分離程式是:首先把含有蛋白質的組織或細胞進行破碎,然後抽提出蛋白質液經離心過濾,根據所提蛋白質的特性和純度的要求,用適當的方法使蛋白質分離出來,如沉澱法:包括鹽析法、PEG法、等電點法、有機溶劑法、熱變性法。
基本介紹
- 中文名:蛋白質分離鑑定法
- 定義:把蛋白質從生物組織中分離出來加以提純和鑑定的方法
蛋白質分離鑑定法是把蛋白質從生物組織中分離出來加以提純和鑑定的方法。其分離程式是:首先把含有蛋白質的組織或細胞進行破碎,然後抽提出蛋白質液經離心過濾,根據所提蛋白質的特性和純度的要求,用適當的方法使蛋白質分離出來,如沉澱法:包括鹽析法、PEG法、等電點法、有機溶劑法、熱變性法。
蛋白質分離鑑定法是把蛋白質從生物組織中分離出來加以提純和鑑定的方法。其分離程式是:首先把含有蛋白質的組織或細胞進行破碎,然後抽提出蛋白質液經離心過濾,根據所提蛋白質的特性和純度的要求,用適當的方法使蛋白質分離出來,如沉澱...
(一)根據配體特異性的分離方法-親和色譜法 親和層析法(aflinity chromatography)是分離蛋白質的一種極為有效的方法,它經常只需經過一步處理即可使某種待提純的蛋白質從很複雜的蛋白質混合物中分離出來,而且純度很高。這種方法是根據某些蛋白質與另一種稱為配體(Ligand)的分子能特異而非共價地結合。其基本原理:蛋白...
蛋白質分離主要根據五種原理:分子大小、溶解度、電荷、吸附性質、對配體分子的生物學親和力等。術語簡介 一、根據分子大小不同的純化方法 1.透析和超過濾 透析(dialysis)是利用蛋白質分子不能通過半透膜的性質,使蛋白質和其它小分子物質分開。常用的半透膜是玻璃紙或稱賽璐玢紙(cellophane paper)、火棉紙(celloid...
* 免疫沉澱法:利用特異抗體識別相應的抗原蛋白,並形成抗原抗體複合物的性質,可從蛋白質混合溶液中分離獲得抗原蛋白。* 電泳法:蛋白質在高於或低於其pI的溶液中為帶電的顆粒,在電場中能向正極或負極移動。這種通過蛋白質在電場中泳動而達到分離各種蛋白質的技術, 稱為電泳(elctrophoresis) 。幾種重要的蛋白質...
《生命樣品系統中蛋白質萃取分離新技術及鑑定方法研究》是依託東北大學,由陳旭偉擔任項目負責人的青年科學基金項目。中文摘要 本項目主要研究生命樣品中蛋白質組份的選擇性萃取分離新技術及鑑定方法,包括:採用室溫離子液體直接萃取全血中的特定蛋白質組分,並闡述相關萃取機理;以離子液體和表面活性劑組成反膠團體系選擇...
聚丙烯醯胺凝膠電泳( polyacrylamide gel electrophoresis,簡稱PAGE),是以聚丙烯醯胺凝膠作為支持介質的一種常用電泳技術,用於分離蛋白質和寡核苷酸。聚丙烯醯胺凝膠由單體丙烯醯胺和甲叉雙丙烯醯胺聚合而成,聚合過程由自由基催化完成。催化聚合的常用方法有兩種:化學聚合法和光聚合法。化學聚合以過硫酸銨(APS)為催化...
採用構建的糖蛋白分離與鑑定體系,結合HPLC-MS/MS與生物信息學工具,對腫瘤細胞表面糖蛋白進行分析鑑定,獲得56種糖蛋白,隨機挑選9種進行mRNA水平和蛋白水平的檢測,與質譜結果基本相符(90%),即本研究成功建立了糖蛋白的分離和鑑定方法,並可用於潛在的腫瘤Marker篩選。此外,採用分離糖蛋白進行拓展研究,建立了一種...
簡單蛋白質只含胺基酸,容易測定。複合蛋白質還另含輔基,如糖、脂質、核酸和金屬等化學物質,還需用其他分析方法鑑定。簡介 用於分析蛋白質的含量、純度、分子量、胺基酸組成和結構等的技術。含量分析 胺基酸是含氮的化合物,一般蛋白質約含15%的氮,用克氏定氮法能計算出樣品中的蛋白質含量。用雙縮脲法測肽鏈的...
雙向凝膠電泳技術及質譜基礎的蛋白質組學研究程式為樣品製備→等電聚焦→聚丙烯醯胺凝膠電泳→凝膠染色→挖取感興趣的蛋白質點→膠內酶切→質譜分析確定肽指紋圖譜或部分胺基酸序列→利用資料庫確定蛋白。蛋白質組研究要求有高解析度的蛋白質分離及準確、靈敏的質譜鑑定技術。凝膠電泳中蛋白質的著色不僅影響蛋白質分離的...
多為酶解、液相色譜分離、串聯質譜及計算機算法的聯合套用鑑定蛋白質。下面以肽質指紋術和肽片段的測序來說明怎樣通過質譜來鑑定蛋白質。(1)肽質指紋術 由Henzel等人於1993年提出。用酶(最常用的是胰酶)對由2-DE分離的蛋白在膠上或在膜上於精氨酸或賴氨酸的C-末端處進行斷裂,斷裂所產生的精確的分子量通過質譜來...
《銅脅迫下植物金屬結合蛋白分離鑑定和生理功能研究》是沈振國為項目負責人,南京農業大學為依託單位的面上項目。項目摘要 銅是植物必需營養元素。銅過量時,蛋白質與銅的結合會改變其結構和功能從而影響許多生理過程;同時,蛋白質與銅離子的結合可降低銅在細胞質中的離子活度。充分理解銅結合蛋白是銅毒害的靶標分子...
《蛋白質色譜分離技術》可作為從事生物化學、生物化工、生化製藥、基因工程、藥品分析和血液製品等專業的科技工作者閱讀使用,也可作為相關專業大學生和研究生的參考書。圖書目錄 第1章 緒論 第2章 色譜法分類及理論 第3章 離子交換色譜 第4章 親和色譜 第5章 排阻色譜 第6章 反相色譜 第7章 疏水作用色譜 第8...
第1部分 分離純化方法 第1章 離心(袁 輝 武育榮)17 11 原理和分類17 111 基本原理17 112 分類20 113 分析性超速離心24 12 套用實例25 121 套用超速離心法分離血漿脂蛋白25 122 Ficoll密度梯度離心法分離外周血單個核細胞26 13 標準操作和注意事項27 131 關於...
《複雜基體樣品系統生命物質的分離富集與鑑定方法研究》是依託東北大學,由王建華擔任項目負責人的重點項目。中文摘要 建立離子液體萃取DNA、蛋白質及金屬蛋白質組的分離體系,了解萃取過程中的相關作用方式,及生命物質在兩相間的轉化遷移情況,闡述萃取機理。.研究離子液體雙水相及反膠束從複雜基體中萃取分離DNA、蛋白質...
可以從凝膠中切取出單個蛋白質點,並通過質譜進行鑑定。研究方向 隨著技術的飛速發展,已能分離出10 000個斑點(spot)。 當雙向電泳斑點的全面分析成為現實的時候,蛋白質組的分析變得可行。樣品製備(sample prepareation)和溶解同樣事關2-DE的成效,目標是儘可能擴大其溶解度和解聚,以提高解析度。用化學法和機械...
通過MCAC法,SOD中所含相對較多的組氨酸上的咪唑基可與螯合柱上金屬離子特異結合,通過特殊洗脫而分離純化。 3.用於蛋白質的分析 金屬螯合親和層析可用於蛋白質的分析鑑定。Jiang等通過金屬螯合親和層析結合金屬離子親和毛細管電泳技術(IMACE)對糖基化導致13t一胰凝乳蛋白酶結構變化進行了研究,證明糖基化作用產生兩個...
蛋白鑑定 一旦通過差異分析或其它方法找到感興趣的蛋白後.就可以從凝膠中或膜上切取這些目標蛋白質作鑑定。現在絕大多數蛋白質的鑑定是通過質譜分析來完成的。分離蛋白質組所有蛋白 分離蛋白質組所有蛋白的兩個關鍵參數是其解析度和可重複性。在目前情況下,雙向凝膠電泳的一塊膠板(16cm×20cm)可分出3~4千個,...
1.聚丙烯醯胺凝膠電泳可用做蛋白質純度的鑑定。聚丙烯醯胺凝膠電泳同時具有電荷效應和分子篩效應,可以將分子大小相同而帶不同數量電荷的物質分離開,並且還可以將帶相同數量電荷而分子大小不同的物質分離開。其解析度遠遠高於一般層析方法和電泳方法,可以檢出10~10g的樣品,且重複性好,沒有電滲作用。2.SDS聚丙烯醯...
免疫印跡常用於鑑定某種蛋白,並能對蛋白進行定性和半定量分析。結合化學發光檢測,可以同時比較多個樣品同種蛋白的表達量差異。原理如圖 基本原理 將混合抗原樣品在凝膠板上進行單向或雙向電泳分離, 然後取固定化基質膜與凝膠相貼。在印跡紙的自然吸附力、電場力或其它外力作用下, 使凝膠中的單一抗原組份轉移到印跡紙...