《腫瘤表面糖蛋白的快速分離與鑑定》是依託南開大學，由張奇擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：腫瘤表面糖蛋白的快速分離與鑑定
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：張奇
- 依託單位：南開大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
腫瘤細胞表面糖蛋白的結構和功能在腫瘤免疫中有著重要作用，因此開展腫瘤相關糖蛋白的研究一直是腫瘤分子生物學關注的焦點。本研究從腫瘤細胞表面糖蛋白的研究方法入手，建立一套N-糖基化糖蛋白的特異性分離和鑑定方法，為開展腫瘤糖蛋白質組學的研究提供有效的技術支撐。本研究首先利用代謝標記技術，採用自行合成的含有疊氮基團的乙醯化葡萄糖和甘露糖分別培養腫瘤細胞，使細胞表面的糖蛋白被含疊氮基團的糖轉糖基化；隨後同自行合成的炔基化亞氨基生物素進行點擊化學反應，使膜上的糖蛋白生物素化；生物素化的糖蛋白藉助於鏈霉親和素固定化的磁性微球進行分離；分離的糖蛋白進而通過二維電泳、質譜解析完成對其的篩選及鑑定工作。本研究套用化學生物學、蛋白質組學、糖生物學等基本理論，結合代謝標記、點擊化學和磁性分離技術，探討腫瘤細胞表面糖蛋白的分離鑑定方法，為腫瘤相關糖蛋白質組學的研究提供技術支持，具有重要的理論和套用價值。
結題摘要
本研究合成了系列小分子非天然單糖探針12種及檢測探針11種，通過自行合成的互補探針，構建了對非天然單糖代謝效率的檢測體系，同時構建了基於點擊化學的細胞表面糖蛋白特別是唾液酸化糖蛋白的代謝標記體系，為腫瘤表面糖蛋白的研究提供了獨特的方法。採用構建的糖蛋白分離與鑑定體系，結合HPLC-MS/MS與生物信息學工具，對腫瘤細胞表面糖蛋白進行分析鑑定，獲得56種糖蛋白，隨機挑選9種進行mRNA水平和蛋白水平的檢測，與質譜結果基本相符（90%），即本研究成功建立了糖蛋白的分離和鑑定方法，並可用於潛在的腫瘤Marker篩選。此外，採用分離糖蛋白進行拓展研究，建立了一種模擬腫瘤細胞表面糖蛋白的納米螢光探針示蹤方法，並以此模擬腫瘤細胞，著重研究腫瘤細胞膜糖蛋白對免疫系統的激活作用，為腫瘤免疫與逃逸機制的研究，以及糖蛋白疫苗的合成與開發提供工具與方法。
