來源
藻膽蛋白主要存在於
藍藻、
紅藻、
隱藻和少數一些
甲藻中 ,其主要功能是作為光合作用的捕光色素複合體 ,在一些藻
類中藻膽蛋白也可以作為儲藏蛋白 ,以使藻類在氮源缺乏的季節得以生存。
分類
藻膽蛋白的種類已知的藻膽蛋白主要可以分為以下4大類
3、
藻紅藍蛋白(Phycoerythrocyanin,PEC)
4、
別藻藍蛋白(Allophycocyanin,APC)
藻膽蛋白是一種新型的螢光標記物,在螢光免疫分析方面有著廣闊的套用前景。其套用領域主要包括螢光激活細胞分類、流式細胞螢光測定、螢光免疫檢測以及單分子檢測等。在可溶性抗原、抗體檢測方面的研究則開展較少。
研究
能量轉移
STOKES位移是螢光分析中的重要參數,它的大小決定著螢光探針的可靠性和靈敏性。螢光標記物如具有較大的STOKES位移,螢光檢測時來自瑞利散射、拉曼散射的干擾就較小。STOKES位移越大,發射的螢光就越靠近可見光譜的紅端,這有利於分析生化樣品。因為在紅區生化基質和血清成分造成的螢光干擾劇減,檢測靈敏度可顯著提高。藻膽蛋白具有較大的STOKES位移。其中
藻紅蛋白就高達80nm,直接用作探針,就能達到較高的靈敏度。如要進一步提高靈敏度,一種方法就是利用能量轉移原理,選擇適宜的配對試劑構成能量轉移試劑對製備性質穩定、可標記性強、螢光性能更好的藻膽蛋白偶聯螢光標記物來增大STOKES位移。在免疫螢光分析中,藻膽蛋白既是有效的能量供體,又是適宜的受體材料。除不同種類的藻膽蛋白之間可形成交聯體複合物外,其它螢光染料如螢光素、德克薩斯紅等都可與藻膽蛋白組成能量轉移試劑對。1996年,Roederer等[1]以花青染料Cy7與PE、APC分別交聯,其中Cy7與PE的交聯物的STOKES位移高達300nm。螢光級聯的PE-APC交聯體,STOKES位移也將近200nm,能量轉移效率高達90%。
藻膽蛋白共價偶聯物
藻膽蛋白包含大量的賴氨酸殘基,B-PE分子含有約85個賴氨酸殘基,而APC含36個。通過這些賴氨酸殘基側鏈,藻膽蛋白可與其它生物大分子相偶聯。常用的方法是使用異雙功能試劑(如SPDP等)與待偶聯的大分子反應,使其衍生化;以吡啶二硫化物使藻膽蛋白巰基化,再將兩者按一定比例混合併溫育,得藻膽蛋白共價偶合物[2]。
在提純藻膽蛋白偶聯產物時,凝膠過濾不失為一種有效手段。以瓊脂糖凝膠為填料的層析柱,其分離效果就很理想。此外,基於羥基磷灰石的離子交換色譜也較為實用。
套用領域
藻膽蛋白的套用領域主要包括螢光激活細胞分類、流式細胞螢光測定、螢光免疫檢測以及單分子檢測等多項技術領域。但在檢測可溶性抗原、抗體方面,藻膽蛋白螢光探針的試劑化、商品化程度還不很高。