草地貪夜蛾卵巢細胞中新caspase的鑑定及功能研究

《草地貪夜蛾卵巢細胞中新caspase的鑑定及功能研究》是依託武漢大學，由劉青珍擔任項目負責人的面上項目。

基本介紹

• 中文名：草地貪夜蛾卵巢細胞中新caspase的鑑定及功能研究
• 項目類別：面上項目
• 項目負責人：劉青珍
• 依託單位：武漢大學

項目摘要

草地貪夜蛾卵巢細胞 (Sf9)是昆蟲細胞和桿狀病毒凋亡相關研究最常用細胞。遺憾的是，Sf9細胞凋亡信號傳導途徑仍不清楚，這使苜蓿銀紋夜蛾核型多角體病毒AcMNPV與Sf9凋亡相關因子的相互作用至今仍未闡明，Sf9中caspase的鑑定是該問題的瓶頸。Sf-caspase-1是Sf9中唯一被鑑定的caspase，多項研究表明，Sf9還有其它caspase，國際上（包括申請人）已發表論文中稱之為Sf-caspase-X，但常規方法至今未能鑑定甚至檢測到Sf-caspase-X。申請人成功地用人工合成的caspase抑制劑標記並檢測到Sf9中多種活化caspase，並證明了所用方法的特異性，這是證明除Sf-caspase-1外，Sf9還有其它caspase的第一個直接證據。本項目擬以此為基礎，鑑定Sf9中新的caspase並研究其功能，闡明Sf9細胞凋亡信號傳導途徑，解決困擾該領域科學家的問題。

結題摘要

草地貪夜蛾卵巢細胞 （Sf9）是昆蟲細胞和桿狀病毒凋亡相關研究最常用細胞。遺憾的是，Sf9細胞凋亡信號傳導途徑仍不清楚，Sf9中caspase的鑑定是該問題的瓶頸。雖然有多項研究表明Sf9中還有上游caspase，但是，在本項目開始時，其下游Sf-caspase-1是Sf9中唯一被鑑定的caspase。本項目擬鑑定出Sf9中新的caspase並研究其功能，為全面研究Sf9細胞中凋亡信號的傳導途徑奠定基礎。 　　本項目研究成功從草地貪夜蛾卵巢細胞中鑑定了兩個新的caspases ；構建其原核表達質粒，並在大腸桿菌中成功表達；確定了其最適底物；預測了其活性位點和切割位點；研究了其對Sf-caspase-1的作用，證明本項目所鑑定的兩個caspase均能在體外切割Sf-caspase-1；在細胞水平證明，本項目所鑑定的兩個caspase在Sf9細胞中過表達均能誘導Sf9細胞凋亡、與Sf-caspase-1共轉Sf9細胞均能顯著激活Sf-caspase-1。